Инфекции в акушерстве и гинекологии - Макаров О.В.
ISBN 5-98322-263-5
Скачать (прямая ссылка):
• деление протопласта ретикулярного кольца и отшнуровка мелких шаровидных форм в периплазматическом пространстве;
• мелковакуолярные включения, лежащие на периферии клеток, медленно транспортирующиеся в перинуклеарную зону;
• огромное количество мембранных пузырьков неправильной формы внутри ретикулярных телец.
Недостатком метода является высокая стоимость и малая доступность обследования для широкого круга пациентов, недостаток высококвалифицированных специалистов.
роль инфекции и факторов реактивности организма в клинике, диагностике и лечении
наиболее часто встречающихся воспалительных заболеваний женских половых органов 217
Более высокой чувствительностью и специфичностью (90—95%) обладает ИФА, который рекомендован МЗ и СР РФ для диагностики хламидиоза. При непрямой флюоресценции гипериммунную сыворотку наносят на предметное стекло с исследуемым материалом. После отмывания препарат окрашивают соответствующим антиглобулином, меченным флюоресцирующей краской. Результат оценивают при люминесцентном микроскопировании. При непрямой иммунофлюоресценции в качестве реактива используются моноклональ-ные антитела. Использование моноклональных антител исключает возможность ложноположительных результатов, которые при непрямой иммунофлюоресценции могут иметь место за счет нежизнеспособных хламидий, а также других бактерий, имеющих перекрестно реагирующие антигены. По одной из методик ЭТ выявляются в мазках, взятых с инфицированных участков. Принцип метода заключается в использованиии моноклональных антител, меченных флюоресцирующим изотиоционатом против ГБНМ хламидий, имеющегося во всех известных сероварах С. trachomatis, а также у РТ и ЭТ. При просмотре мазков в люминесцентном микроскопе видны ярко-зеленые элементарные или РТ на красно-коричневом фоне окрашенных клеток. Для правильной оценки результата в мазке должно быть не менее 50 эпителиальных клеток.
Метод прямой иммунофлюоресценции предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. При люминесцентной микроскопии включения хламидий определяются в виде зеленой или желто-зеленой флюоресценции включений на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток. Включения могут иметь зернистую, гомогенную или смешанную структуру.
К недостаткам этих методов относят: субъективность интерпретации полученных результатов; трудности при работе с большим количеством мазков; сложность диагностики при наличии смешанной инфекции, что связано с тем, что при этом слизистая оболочка за счет большого количества лейкоцитов покрыта слоем белка, следствием чего могут быть ложноположительные результаты; зависимость результата исследования от тщательности и правильности забора материала; недостаточное количество высококвалифицированных специалистов.
Метод выделения хламидий в культуре клеток. Соскоб материала производят с пораженного участка ложкой Фолькмана или специальными щетками. Взятый материал помещают в транспортную среду (фосфатный буфер с сахарозой, с добавлением инактивированной нагреванием сыворотки крупного рогатого скота, стрептомицина, амфоторецина).
Для исследования используют культуру клеток, чаще McCoy, обработанных циклогексемидом. Забранный материал наслаивается на монослой культуры клеток, выращенных на покровных стеклах, с предварительным удалением ростковой среды. Затем зараженная клеточная культура помещается во флаконы и центрифугируется в течение 1 ч при 3000 об./мин, что увеличивает число внутриклеточных включений. После центрифугирования материал сливают в пробирки, куда добавляют изолирующую среду «Игла» («Eaglas MEM») с циклогексимидом в концентрации 2 мкг/мл. Пробирки инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 48—72 ч (время соответствует циклу развития хламидий). Затем покровные стекла с монослоем достают из пробирок, укладывают на предметные стекла монослоем вниз в канадском бальзаме и определяют включения возбудителя. Перед этим проводят фиксацию и окраску мазка (окрашивание проводится по Романовскому—Гимзе, раствором Люголя либо флюоресцирующими антителами).
Из существующих методов диагностики этот метод самый трудоемкий и Дорогостоящий, требующий специального оснащения лаборатории, высоко-
218 Глава II
квалифицированного персонала и соблюдения особых правил транспортировки клинического образца для исследования. Исследование занимает от 3 до
7 сут. Все вышеизложенное делает метод малодоступным для широкого ис
пользования в амбулаторной сети. Только специализированные медицинские
учреждения могут проводить подобные исследования и гарантировать диагно
стическую точность метода.
Большие успехи в области молекулярной биологии не оставили в стороне и диагностику хламидийной инфекции. Методы молекулярной диагностики основаны на определении специфических для С. trachomatis последовательностей олигонуклеотидов ДНК или рибосомальной РНК. Новым методом ДНК-диагностики, который может обогнать по чувствительности все остальные методы молекулярной биологии, является ПЦР. Она позволяет производить амплификацию определенных последовательностей ДНК путем повторных циклов высокотемпературной денатурации, нуклеотидного отжигания и опосредованного полимеразного вытягивания цепи. После 25 циклов достигается увеличение в сотни раз той последовательности ДНК, которая исследуется.