Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови - Макацария А.Д.
ISBN 5-8249-0078-7
Скачать (прямая ссылка):
Препараты фактора VIIa обладают достаточно выгодным преимуществом перед концентратами протромбина, и прежде всего это преимущество заключается в минимальном риске возникновения тромбоэмболических осложнений.
Фактор VII присутствует в крови в очень низкой концентрации. Неактивированный фактор VII имеет одноцепочечную структуру, которая включает в себя N-концевой Gla-домен, предназначенный для связывания с фосфолипидами, С-концевой серин-протеиназный домен, обладающий кофакторной активностью. Два ЭФР-подобных домена расположены между GIa и серин-протеиназным доменами.
458
Все четыре домена вовлечены во взаимодействие с тканевым фактором. В модулировании протеиназной активности значительную роль
играют кальций-связывающие участки, расположенные в области Gla-домена и в первом ЭФР-подобном домене. В отсутствии ионов кальция фактор VII не обладает кофакторной активностью.
Механизм антигеморрагической активности фактора VII тесно связан с повышением экспрессии ТФ при повреждении сосудов. ТФ является мембрано-связанным гликопротеином, экспрессируе-мым на достаточно большом количестве клеток, однако наиболее важную функцию он выполняет в субэндотелии, являясь своеобразным рецептором для фактора VII. Не связанный с ТФ фактор VII обладает минимальной протеолитической активностью, однако при связывании с ТФ, протеолитическая активность фактора VIl становится на несколько порядков выше ввиду структурных изменений. ТФ, фактор VIIa и отрицательно заряженные фосфолипиды обра-
зуют внешний теназныи комплекс, активирующий фактор X. После образования активного фактора Xa. он, в свою очередь, формирует протромбиназный комплекс. Образующиеся незначительные концентрации тромбина активируют тромбоциты для образования первичной гемостатической бляшки и осуществляют положительную обратную связь, вовлекающую активацию факторов IX, V, VIII и приводящую к лавинообразному нарастанию концентрации тромбина в области повреждения сосуда. Кроме этого, в недавних исследованиях было установлено, что высокие дозы pVIIa могут напрямую активировать фактор X и фактор IX.
Препараты фактора VIIa можно разделить на два большие класса: плазменные концентраты и рекомбинантный фактор Vila.
Впервые плазменный концентрат фактора VIIa был получен в 1978 году и использован в лечении двух пациентов с гемофилией, у которых обнаружились антитела к фактору Villa. Результаты были ошеломляющие, однако стало ясно, что массовое внедрение концентратов фактора VIIa в широкую клиническую практику невозможно прежде всего из-за трудностей его получения от доноров. В то же время активно разрабатывались технологии получения рекомби-нантного фактора Vila, и через 10 лет рекомбинантный фактор VIIa был получен. Приоритет в разработке рекомбинантного фактора VII принадлежит компании NovoNordisk. Препарат рекомбинантного фактора Vila (NovoSeven®) используется в странах Европы с 1996 года, в США - с 1999 года, в Японии - с 2000 года, а настоящее время зарегистрирован в России.
По первичной аминокислотной последовательности pVIIa идентичен плазменному фактору Vila. Отличия заключаются в по-странсляционной модификации белка. Так, если в нативном плазменном факторе VIIa все десять остатков глутаминовой кислоты
459
подверглись у-карбоксилированию, то в pVIIa обнаруживается только 9 полностью у-гидроксилироваипых остатков, в то время как один остаток глутаминовой кислоты, расположенный в области 35 остатка, карбокснлироваи на 50%. Однако данный факт не влияет на функциональную активность фактора pVIIa.
Другие посттраисляциопные изменения плазменного фактора VIIa полностью соответствуют таковым у pVIIa.
Процесс получения рекомбинантного фактора VII - сложный и многоступенчатый. Ген фактора VII располагается в 13 хромосоме и содержит 8 экзоиов. Изначально геи фактора VII был клонирован с использованием ВПК клеток, которые тщательно протестированы на идентичность гена фактора VII, стерильность, отсутствие мико-плазм и вирусов. Клетки рабочей группы культивируются в биореакторе с высокой клеточной плотностью. После получения ряда генераций клеточная среда, содержащая достаточное количество pVII отделяется от клеточной массы методом центрифугирования и фильтрацией.
Известно, что активация пативиого одноцепочечиого фактора VII происходит путем расщепления единственной связи Арг152-Иле153. Для лабораторной активации pVII был предложен ряд ферментных систем, однако они либо были не способны полностью осу-ществить гидролиз этой связи, либо осуществляли дополнительные расщепления других связей. В процессе очистки одноцепочечиого пеактивироваипого pVII путем ноппо-обмепиой хроматографии было выявлена аутоактивация pVII. Механизм данного явления до конца не изучен. После оптимизации этого процесса был достигнут выход реакции в 100%.
Очистка полученного pVIIa происходит с использованием Q-ce-рафозпой колонки, нммуноаффншюй колонки, и ашгопобменпой хроматографии. Конечный продукт - препарат NovoSeven® - содержит 1,2 мг, 2,4 мг, 4,8 мг pVIIa соответственно.
