Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Лишманова Ю.Б. -> "Радионуклидная диагностика для практических врачей" -> 19

Радионуклидная диагностика для практических врачей - Лишманова Ю.Б.

Лишманова Ю.Б. , Чернова В.И. Радионуклидная диагностика для практических врачей — Томск: STT, 2004. — 394 c.
ISBN 5-93629-166-9
Скачать (прямая ссылка): raddiagnostdlyavrachey2004.pdf
Предыдущая << 1 .. 13 14 15 16 17 18 < 19 > 20 21 22 23 24 25 .. 304 >> Следующая

Основное преимущество метода КБС - дешевизна, так как исходный материал, используемый для выделения связывающих белков, недорог и доступен.
Основные недостатки метода КБС:
1) низкая по сравнению с РИА чувствительность, так как связывающие белки обычно имеют более низкое сродство к лигандам, чем антитела;
2) низкая специфичность связывающих белков, которые обычно связывают группу близкородственных гормонов - например, тироксинсвязываю-
щий глобулин образует комплексы с тироксином и трийодтиронином;
3) константа сродства связывающих белков сильно зависит от температурного режима, поэтому анализ приходится проводить при низкой температуре в условиях ее строгого контроля.
В связи с вышеперечисленными недостатками метод КБС не нашел широкого распространения и применяется в основном для определения кортизола и цАМФ.
Радиорецепторный анализ является методом, основанным на использовании клеточных рецепторов к гормонам и биологически активным веществам в качестве связывающих агентов. Радиорецепторный анализ отличается более высокой чувствительностью и специфичностью по сравнению с другими методами радиолигандного анализа. Обычно при радиорецеп-торном анализе используются рецепторы, выделенные из плазматических мембран органов-мишеней, которые в химическом отношении представляют собой липопротеидный комплекс. Особое положение занимает определение цАМФ с помощью связывающего белка из скелетных мышц, так как этот метод можно отнести как крадиорецепторному анализу, так и к методу КБС.
Недостатки радиорецепторного метода:
1) его можно использовать только для анализа тех соединений, к которым существуют клеточные рецепторы;
2) сложная методика выделения рецепторов приводит к значительным различиям между препаратами, что затрудняет стандартизацию метода;
3) рецепторы нестойки при хранении.
По причине вышеперечисленных недостатков метод не получил широкого распространения в клинике, хотя в экспериментальных исследованиях применяется достаточно широко.
Радиоэнзиматический анализ отличается от всех вышеописанных радиолигандных методов тем, что в его основе лежит не комплексообразование определяемого лиганда с антителом или другим связывающим агентом, а ферментативное расщепление меченого субстрата с переносом радиоактивных фрагментов последнего на конечные продукты реакции. Предшественниками этих продуктов и являются определяемые вещества. Остается лишь хроматографичес-ки разделить их и радиометрировать с последующим пересчетом по калибровочной кривой.
Преимуществом радиоэнзиматического метода является то, что его можно использовать в тех случаях, когда получение антител к определяемому лиган-ду затруднено или определяемый лиганд быстро разрушается при инкубации.
Недостатки радиоэнзиматического метода:
28
Глава 2. РАДИОНУКЛИДНАЯ ДИАГНОСТИКА В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
- относительная техническая сложность;
- более низкая, по сравнению с РИА, чувствительность.
В связи с вышеперечисленными недостатками метод не нашел широкого распространения в клинике.
Математическая обработка полученных результатов и построение калибровочной кривой. Пересчет результатов радиометрии проб в единицы концентрации или активности производится методом построения калибровочной кривой, для чего используются стандарты с известным количеством немеченого соединения. По мере увеличения концентрации лиганда в стандарте количество радиоактивных комплексов уменьшается и, следовательно, снижается радиоактивность получаемого осадка. Наибольшей радиоактивностью обладает осадок в пробирках, не содержащих немеченого антигена, так называемый нулевой стандарт, который обозначается как Во. Радиоактивность осадка в пробирках со стандартами обозначают как В. При построении калибровочного графика по оси ординат откладывают процент связывания метки — отношение (В/Во)-100%. Обычно используется пять или шесть стандартов, по мере увеличения концентрации лиганда в которых В/Во уменьшается.
В некоторых РИА-наборах осаждается не комплекс «антиген-антитело», а свободный лиганд с помощью активированного угля - например, наборы для определения простагландинов. В этих наборах определяется радиоактивность не осадка, а надосадоч-ной жидкости, поэтому при построении калибровочной кривой процент связывания повышается по мере увеличения концентрации стандартов. Помимо нулевого стандарта и стандартов гормона используются еще две пробы: а) тотальная проба (T), которая содержит только метку и характеризует ее активность; б) проба на неспецифическое связывание (HCB), содержащая все компоненты РИА-набора кроме антитела и позволяющая определить неспецифическое связывание метки разделяющими компонентами и стенками пробирки.
Неспецифическим связыванием определяемого гормона очень часто обладает сама сыворотка. Если процент неспецифического связывания, определенный как отношение (НСВо/Т) -100% или (НСВ/Т) 100%, не превышает 5, то его можно не учитывать, если же он в неизвестных пробах больше 5, то его нужно вычислять для каждой пробы или проводить экстракцию гормона из плазмы крови для уменьшения процента неспецифического связывания, как это делается для вазопрессина, циклических нуклеотидов, соматостатина, простагландинов и ряда других гормонов и биологически активных веществ.
Предыдущая << 1 .. 13 14 15 16 17 18 < 19 > 20 21 22 23 24 25 .. 304 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed