Антибактериальные лекарственные средства. Методы стандартизации препаратов - Хабриев Р.У.
ISBN 5-255-04072-1
Скачать (прямая ссылка):
При определении концентрации антибиотика в сыворотке, как правило, используют двухслойную среду (агар), которую предварительно разливают в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм в объеме 20 мл (пропись сред приведена в табл. 8.2). Далее на хорошо застывшей поверхности агара делают 4 специальные лунки (~ 6 мм) в которые вносят 5 мкл стандартного раствора антибиотика и полученной сыворотки без разведения или после соответствующего разведения (если предполагаемая концентрация антибиотика в крови может превысить контрольную) донорской сывороткой или буферным раствором. Чашки инкубируют 18-24 ч в термостате при температуре 37 °С.
При определении концентрации антибиотика в тканях чаще используют однослойный питательный агар, который также предварительно разливают в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм в объеме 15 мл (пропись питательной среды приведена в табл. 8.2). На остывший агар наносят (стерильным фальконом) в трех направлениях под углом 60° иноку-люм, соответствующей тест-культуры. Далее на засеянную поверхность помещают 3 диска, пропитанные 10 мкл антибиотика в диапазоне концентраций стандартной кривой и вытяж-кой/надосадочной жидкостью образцов исследуемой ткани. Чашки инкубируют 18-24 ч в термостате при температуре 35 °С.
Расчет концентрации антибиотика в испытуемой пробе сыворотки крови или ткани проводят по стандартным кривым, которые строятся по результатам титрования стандартного раствора антибиотика. Для получения воспроизводимых результатов необходимо соблюдение строгой стандартизации опытов.
Кроме определения концентрации, для изучения фармакокинетики различных JIC оценивают процесс снижения концентрации препарата, который, как правило, описывается би-
328
экспоненциальным или моноэкспоненциальным уравнением [5, 6].
Фармакокинетические параметры, чаще это внемодельные параметры, характеризуют особенности всасывания, распределения и выведения ЛС:
1) период полувыведения — Т1/2 (ч), этот параметр характеризует время, в течение которого концентрация препарата снижается вдвое (Т1/2 = 0.693/kel; kel = In (Cmax/Cmin)/(t2 - tl);
2) клиренс — Cl (мл/мин x кг), данный параметр определяет объем сыворотки, который освобождается от препарата за единицу времени (С1 = Д/AUC или Cl = Vd kel);
3) объем распределения — Vd (л), это параметр, который имеет формальный смысл коэффициента пропорциональности между количеством препарата в сыворотке и его концентрацией (Vd = MRT/C1 или Vd = Доза/Cl, где Д — доза антибиотика);
4) AUC — площадь под кривой «концентрация антибиотика (С) — время (t)», которая отражает площадь под кривой кинетики препарата (снижение концентрации во времени), рассчитывают методом трапеций или определяют по формуле:
AUC = \ С (t) dt = Доза/Cl.
Полученные параметры используют для разработки схем терапии, выработки индивидуальных доз и интервалов дозирования препаратов [6, 7].
Таким образом, метод определения концентрации препарата, как правило, выбирается с учетом группы лекарственных средств и цели определения его концентрации.
Микробиологический метод определения концентрации антибактериальных препаратов характеризуется, с одной стороны, сравнимой точностью (стандартная ошибка < 10 %) и чувствительностью с иммуноферментным методом, с другой — доступностью в исполнении и выраженной дешевизной по сравнению со всеми другими методами.
Таблица 8.1. Питательные среды и тест-культуры, используемые для микробиологического метода определения концентрации антибиотиков
Антибио Состав среды Импортные Тест-культура и ее
тик аналоги посевная доза
Пени «Голодный» агар --- агар- S. aureus 209 Р
циллины агар -Ь 0.3 % Na2HP04 (40 000 000 мик
(pH = 6.8-7.0) робных тел в 1 мл
Питательный агар --- 1 % среды)
голодный агар + 130 мг%
аминного азота + 0.1 %
глюкоза (pH = 6.8-7.0)
329
Продолжение
Антибио Состав среды Импортные Тест-культура и ее
тик аналоги посевная доза
Цефало То же ? В. subtilis АТСС
спорины 6633 (40 000 000
микробных тел в
1 мл среды),
t = 65-70 °С
Макро Используется однослой Medium 11 М. luteus АТСС
лиды ный агар --- 1.5 % АХ*, (BBL) 934 (10 000 000
обогащенный 30-35 мг% микробных тел в
аминного азота 1 мл среды),
(pH = 7.8-8.0) t = 65 °С
Амино «Голодный» агар --- агар- Medium 1 В. subtilis АТСС
гликози агар + Na2HP04 (BBL) 6633 (100 000 000
