Заболевание парадонта - Грудянов А.И.
ISBN 978-5-9986-0002-9
Скачать (прямая ссылка):
104
Заболевания пародонта
обоснованием для изучения этих биохимических показателей в целях объективации состояния тканей пародонта и прогнозирования эффективности лечения.
Определение содержания фосфатидилинозитов в крови
• Фосфоинозитиды (ФИ) — выделяют из фракции фосфолипидов путем проточной горизонтальной хроматографии. Количественное содержание определяют на денситометре «БИАН» (Россия).
• Арахидоновая кислота (АК) — выделяют с помощью газожидкостной хроматографии.
• Простагландины — определяют радиоиммунологическим методом с помощью сцинтилляционного счетчика Mark-З (США).
Для определения содержания фосфатидилинозитов в крови выделяют фракцию фосфолипидов. С этой целью к пробам крови добавляют смесь растворителей хлороформ/метанол 1:1 в объеме 3 мл. Затем фильтруют в мерные пробирки с притертой пробкой объемом 20 мл. Осадок на фильтре промывают смесью хлороформ/метанола 2:1, содержащей 1 % концентрированной соляной кислоты по объему.
К фильтрату добавляют 0,4 мл 0,02 % раствора кальция хлорида, затем в течение 4—5 мин перемешивают. После четкого расслоения верхнюю фазу отсасывают и 4-кратно промывают смесью хлороформ/метанол и 0,02 % кальция хлорид в соотношении 3:48:47.
Исследуемый липидный экстракт наносят на хроматографическую пластинку на расстоянии 2 см от края пластинки. Затем пластинку помещают в плоскую стеклянную камеру для проточной горизонтальной хроматографии. Выделение фосфолипидов проводят в системе хлороформ-метанол-7н-аммиак (13:7:1).
Идентификацию фракции ФИ проводят с помощью цветных тестов фирмы Sigma (США). Количественное содержание ФИ определяют денситометрическим методом на денситометре «БИАН» (Россия). Результаты выражают в нмолях фосфора ФИ на 1 мг белка.
Выделение арахидоновой кислоты и простагландинов Е
Содержание АК определяют с помощью газожидкостной хроматографии, простагландины Е (ПГЕ) выделяют радиоиммунологическим методом с помощью сцинтилляционного счетчика Mark-3 (Nuclear Chicago, США) с применением наборов реагентов (Clinical Assays, США). Уровень содержания АК в крови выражают в процентах, количество ПГЕ — в пг/мл крови.
В исследовании О. А. Зориной (2003) изучено содержание ФИ, АК и ПГЕ в крови у больных пародонтитом средней и тяжелой степени.
Результаты биохимического исследования венозной крови показали, что у больных пародонтитом повышается уровень ФИ и их метаболитов — АК и ПГЕ, причем содержание этих биологически активных веществ зависит от тяжести заболевания (коэффициент сопряженности признаков Пирсона равен соответственно 0,89, 0,92 и 0,87).
Так, при тяжелой степени пародонтита количество ФИ в крови было значительно выше, чем при средней степени поражения — 15,7+0,5 и 11,5±0,5 соответственно. Эти показатели значительно отличаются от уровня ФИ в крови у здоровых лиц, у которых он не превышает 7—7,5.
Глава 3. Методы диагностики заболеваний пародонта
105
Выявлено, что изменение метаболизма ФИ у больных пародонтитом способствует повышению концентрации ненасыщенной жирной арахидоновой кислоты. Так, у пациентов со средней степенью пародонтита содержание АК в крови было равно 8,1±0,2, с тяжелой степенью — 8,7±0,3, тогда как в норме этот показатель равен 7.
Увеличение концентрации АК, в свою очередь, приводит к повышению количества ПГЕ. В нашем исследовании содержание ПГЕ в венозной крови составляло 1782+45 у пациентов с тяжелой степенью заболевания, 1697+18 — со средней степенью, в то время как у здоровых людей этот показатель значительно ниже (1470— 1550).
Интегральные показатели метаболизма ФИ у больных пародонтитом были исследованы также в десневой крови, где наблюдались аналогичные тенденции. Концентрация ФИ достигала 15,2+0,2 у больных с пародонтитом тяжелой степени и 10,9+0,2 — средней степени.
Увеличение содержания ФИ в десневой крови сопровождалось значительным повышением количества АК. Так, концентрация АК составляла в среднем 8,9±0,3 у больных пародонтитом тяжелой степени и 8,3±0,2 — средней степени.
Уровень ПГЕ также был выше нормы: 1795+53 у пациентов с тяжелой степенью заболевания, 1705+25 — со средней степенью.
Поскольку изменения содержания ФИ и их метаболитов в крови у пациентов с пародонтитом могли быть обусловлены не только наличием воспалительного процесса в пародонте, но и другими причинами, например возрастом пациентов и наличием у них сопутствующих заболеваний, мы провели изучение взаимосвязей биохимических показателей с этими факторами.
Анализ показал, что содержание ФИ, АК и ПГЕ в крови имело среднюю зависимость от возраста пациентов (значения коэффициента корреляции были соответственно равны 0,52, 0,56 и 0,47) и очень слабо зависело от наличия у пациента сопутствующих заболеваний (коэффициент сопряженности признаков Пирсона 0,32, 0,41, 0,37). Положительные значения коэффициентов свидетельствуют о прямой корреляционной зависимости, а отрицательные значения — об обратной зависимости. Так, например, содержание ФИ, АК и ПГЕ в крови имело тенденцию к повышению с увеличением возраста пациентов и было несколько выше при наличии у них хронических соматических заболеваний. Поскольку установлена стойкая зависимость биохимических показателей от степени тяжести пародонтита, то можно говорить о том, что выявленные у больных пародонтитом нарушения метаболизма ФИ обусловлены именно наличием активного воспалительно-деструктивного процесса в пародонте, нежели другими факторами.
