Заболевание парадонта - Грудянов А.И.
ISBN 978-5-9986-0002-9
Скачать (прямая ссылка):
Глава 3. Методы диагностики заболеваний пародонта
83
Сравнительно недавно для идентификации бактерий стали использовать масс-спектроскопию. Масс-спектрометр сортирует молекулы клетки по соотношению молекулярная масса/заряд и составляет характеристические наборы значений для каждого типа клеток. Этот метод также ограниченно годен для диагностики, поскольку клетки разных видов микроорганизмов часто обладают очень сходными молекулами, а количество этих молекул может сильно варьировать на разных стадиях клеточного цикла [13].
Высокоспецифичными методами определения микробных антигенов являются иммуноблоттинг и полимеразная цепная реакция, но и они имеют свои недостатки.
Рассмотрим методы идентификации микроорганизмов более подробно.
Микроскопирование
Изучение качественного состава микроорганизмов в зубном налете, содержимом зубодесневых борозд и ПК проводят с помощью микроскопии в темном поле или фазово-контрастной микроскопии по М. О. Биргеру (1982).
При фазово-контрастной микроскопии определяют процентное содержание пяти морфологических форм микроорганизмов (кокки, неподвижные палочки, подвижные палочки, извитые формы, филаменты). Рассчитывают коэффициент устойчивости микроорганизмов как соотношение неподвижных и подвижных форм микроорганизмов.
Культивирование
Со времен Коха и Пастера культивирование было основным методом выделения и изучения свойств микроорганизмов. Современные знания о свойствах микрофлоры ротовой полости были получены с использованием культуральных методов, и молекулярно-биологические работы по изучению орального микробного сообщества в основном подтверждают данные классических исследований, лишь несколько расширяя спектр микроорганизмов биопленки [12].
Помимо классических и синтетических сред было разработано множество селективных сред, поддерживающие рост только определенных групп микроорганизмов, и дифференциальных, на которых колонии нужного вида клеток окрашивались, тогда как остальные оставались бесцветными. Однако во всех случаях формирование колонии проводится из единственной клетки — чистой культуры, которая в дальнейшем характеризуется микроскопически и/или по физиологическим и биохимическим свойствам.
Одним из часто применяющихся в клинической практике культуральных микробиологических методов является метод посева по Gold (метод секторных посевов).
Для определения количественного состава микроорганизмов методом посева по Gold материал собирают с помощью стерильного стандартного диска диаметром 6 мм, изготовленного из целлофановой пленки толщиной 40 мкм.
Диск вводят в ПК пуговчатым зондом так, чтобы он был согнут пополам. Оставляют на 1 мин для заполнения пространства между согнутыми краями диска содержимым ПК, после чего диск извлекают пинцетом и помещают в пробирку с фосфатным буфером. Взвесь тщательно гомогенизируют и делают посев на кровяном агаре, используя бактериологическую петлю диаметром 2 мм (емкость
0,005 мл). По окончании инкубации проводят подсчет колоний по секторам.
84
Заболевания пародонта
Количественный состав микроорганизмов оценивают по числу микроколоний на 1 ед. площади диска.
Метод полуколичественной оценки роста аэробной и анаэробной флоры разработан для культивирования факультативных анаэробных микроорганизмов. Материал для микробиологического исследования забирают целлофановым диском и помещают его в пробирки с питательной средой для контроля стерильности, обогащенную пептоном, с добавками твина и гемина (производства г. Оболенск, Московской обл.). Создание анаэробных условий при использовании этой среды обеспечивается содержанием в ее составе тиогликолята натрия.
Образование колоний после инкубации на поверхности питательной среды и в глубину до 1 см оценивают как рост аэробной флоры, а формирование колоний в более глубоких слоях питательной среды — как рост факультативных анаэробных микроорганизмов.
Для выявления дисбиотических сдвигов в полости рта проводят исследование микрофлоры на дисбактериоз по критериям В. В. Хазановой (1996): дисбиотиче-ский сдвиг, дисбактериоз I—II, III и IV степени.
Материал для исследования забирают натощак: пациент тщательно полощет полость рта стерильным физиологическим раствором (10 мл), полученную смывную жидкость используют для приготовления разведений и прямого посева на дифференциально-диагностические среды — кровяной и желточно-солевой агары, среды Эндо и Сабуро и специальную среду для выделения лактобактерий. Рост факультативных микроорганизмов учитывают после инкубации с последующей идентификацией по общепринятой методике.
Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам используют два метода: диско-диффузионный и метод разведений антибиотика в плотной или жидкой питательной среде.
Методика С. М. Навашина (1982) заключается в определении чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам путем диффузии в агар с помощью бумажных дисков, пропитанных антибиотиками.
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют по диаметру окружности свободной от колоний зоны вокруг диска, которая свидетельствует
