Антигельминтики: фармакология и применение - Архипов И.А.
ISBN 978-585941-305-8
Скачать (прямая ссылка):
Гексановые экстракты выпаривают досуха, растворяют в 0,3 см3 гексана и проводят хроматографию. Экстракт наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол» с помощью микропипетки по 0,3 см . Хроматограмму развивают в системе гексан. После поднятия фронта растворителя на 10 см хроматограмму подсушивают и затем облучают УФ-светом до появления пятен фиолетового цвета и опрыскивают 1%-ным раствором AgN03 и
144
далее облучают УФ-светом. Пятна вырезают, переносят на миллиметровую бумагу, обводят и вычисляют их площадь (Н.Н. Савченко, 1990). Нижний предел определяемое™ в пробах - 0,05 мг/кг.
6.6. Салициланилиды
Определение фенасала в мясе рыб проводят методом УФ-спектрофотометрии (И.Е. Шумакович, перс, сообщ.). На 1, 5, 10, 15, 20-е сутки после однократного применения 6%-ной кормолекарственной смеси с фенасалом в терапевтической дозе 120 мг/кг проводят отлов по пяти годовиков карпа. В эти же сроки определяют количество фенасала в воде и водорослях. В качестве контроля используют рыбу и пробы воды и водорослей, отобранные до начала опыта.
Реактивы и оборудование: ацетон ч.д.а.; этилацетат ч.д.а.; н-гексан ч.д.а.; ацетонитрил ч.д.а.; 0,1н НС1, приготовленный стандарт титра; безводный сульфат натрия; вакуумный водоструйный насос; весы аналитические; роторный испаритель; аппарат для встряхивания; УФ-спектрофотометр.
Методика определения фенасала. 10 г гомогенизированного мяса рыб (карпа), взвешенного с точностью до второго знака после запятой, помещают в стеклянный стакан вместимостью 100 мл, добавляют 1 мл 0,1 н НС1, 20 мл ацетона и экстрагируют фенасал при встряхивании на аппарате в течение 1 ч при комнатной температуре. Экстракт фильтруют под вакуумом через воронку Бюхнера в колбу Вюрца. Остаток на фильтре промывают 10 мл ацетона. Фильтрат переносят в делительную воронку вместимостью 100-250 мл, добавляют 20 мл 0,1 н НС1, 30 мл этилацетата и осторожно встряхивают в течение 1 мин. Водную фазу экстрагируют еще два раза порциями по 20 мл этилацетата. Верхний слой органического растворителя фильтруют через безводный сульфат натрия в коническую колбу вместимостью 100 мл. Фазу органического растворителя выпаривают на роторном растворителе в круглодонной колбе до жирного остатка. Колбу обмывают 20 мл гексана и 2 раза порциями по 10 мл ацетонитрила. Оба раствора помещают в делительную воронку вместимостью 100 мл и встряхивают в течение 1 мин. Слой гексана после деления фаз отбрасывают. Ацетонитрил еще раз промывают, встряхивают с 10 мл гексана, переносят в круглодонную колбу и выпаривают досуха. Остаток на колбе обмывают 5 мл ацетона, 0,1 н НС1 и 0,1 мл моноэтанол амином. УФ-спектр полученного раствора снимают в
145
диапазоне длин волн 340-450 мм в кюветах толщиной поглощающего слоя 1 см относительно аналогично приготовленного растворителя. Максимум или плечо в области 370-380 нм прописывают в присутствии фенасала. Чувствительность обнаружения фенасала - 10 мкг в пробе или 1 ppm. Удельный показатель поглощения фенасала в ацетоне после добавления моноэтаноламина Е = 29083. По этой методике определяется до 90 % содержащегося в пробе фенасала.
6.7. Дифенилсульфиды
Остаточные количества битионола в органах и тканях овец и кроликов были изучены радиоактивным методом (JI. Василяу-скас, 1969; А.Й. Вишняускас и др., 1978). Битионол сульфоксид в дозе 40 мг/кг выводится из организма через 95 ч в основном целой молекулой (J.C. Gederain et al., 1969). Кроме того, в ВИГИСе ранее был разработан метод тонкослойной хроматографии для определения остаточных количеств битионола после лечения платенолом (JI.A. Лаптева, М.Б. Мусаев, 1996). Учитывая сложность радиоактивного метода авторами подобран как более при-емлимый и чувствительный для данного препарата метод тонкослойной хроматографии.
Для исследования на содержание сульфоксида битионола после убоя животных, спонтанно инвазированных стронгилятами пищеварительного тракта и дегельминтизированных левацидом в терапевтической дозе, берут кусочки печени, сердца, почек, мышц, жира, легких, а также кровь, желчь и фекалии. До исследования пробы органов и тканей хранят в холодильнике при температуре ~ 20 °С.
Принцип метода основан на извлечении сульфоксида битионола из анализируемых проб ацетоном с добавлением 5 капель 0,1 Н уксусной кислоты, очистке полученного экстракта в системе ацетонитрил-гексан, хроматографировании в тонком слое силикагеля на пластинках «Силуфол», идентификации пятна на пластинке проявляющим реактивом (1%-ным раствором хлорного железа) и определении сульфоксида битионола. Чувствительность метода 0,05 мг/кг; определяемость 80,0+5,0 %.
Реактивы: ацетон; натрий сернокислый безводный; этиловый эфир уксусной кислоты; ацетонитрил; стандартный титр 0,1 Н раствора СНзСООН; 1%-ный раствор хлорного железа в дистиллированной воде.
146
Оборудование: аппарат для встряхивания; ротационный аппарат; весы аналитические; делительные воронки на 250 мл; химические мерные воронки на 50 мл; колбы конические с притертой пробкой на 250 мл; химические мерные цилиндры на 100 мл; плоскодонные колбы со шлифтом на 10 и 150 мл; пипетки на 0,1; 0,2 и 0,5мл; камеры для тонкослойной хроматографии.
