Антигельминтики: фармакология и применение - Архипов И.А.
ISBN 978-585941-305-8
Скачать (прямая ссылка):
Обработка результатов анализа. Количественное определение пиперазина гексагидрата проводят по его ацетилированному производному. Содержание пиперазина гексагидрата в пробе (X, мг/кг или мкг/г) рассчитывают по формуле
Н2хСх V
X - ----------,
НгхРхГг
где #1, #2 - высота пика анализируемого производного пиперазина в стандарте и пробе, мм; С - содержание препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг; V - объем конечного раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования, мкл (200-500 мкл); V\ - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл (2-10 мкл); Р
- масса анализируемой пробы, г.
6.4. Пиримидины
Определение остаточных количеств пирантел тартрата в органах и тканях овец, леченных пирителом, проводили методом тонкослойной хроматографии, стандартизированным R. Gauch et al. (1983), Т.С. Новик, Н.Н. Савченко (1986) для изучения фармакокинетики пирантел тартрата в организме животных.
142
Изучение сроков выведения пирантел тартрата из организма овец провели на 18 цигайских валухах в возрасте 10-12 мес, спонтанно инвазированных стронгилятами пищеварительного тракта. Пирител фирмы «ЛЕК» (Словения) задавали овцам индивидуально перорально однократно в рекомендованной фирмой терапевтической дозе 25 мг/кг по ДВ из расчета 2 г 12,5%-ного порошка на 10 кг массы тела. Двум контрольным валухам препарат не назначали. Животных по 3 головы убивали через 1, 3, 5, 7, 10 и 14 сут после введения препарата. Для исследований на содержание пирантел тартрата после убоя овец брали кусочки печени, почек, мышечной и жировой ткани (околопочечной), легких, а также кровь, желчь и фекалии. До исследования пробы органов и тканей хранили в холодильнике при температуре - 20 °С.
Принцип метода основан на экстракции пирантел тартрата из тканей 0,1 Н раствором соляной кислоты, обезжириванием экстракта путем вымораживания на холоде, очистке экстракта рядом перераспределений между различными растворителями и хроматографирование в тонком слое силикагеля на пластинках «Силу-фол».
Определяемость метода 85%, чувствительность - 0,05 мг/кг.
Растворители и реактивы: ацетон х.ч.; натрий сернокислый безводный; 0,1 Н HCL; хлористый натрий; этиловый эфир; гексан; 1%-ный раствор FeCl3; ацетонитрил; стандартный раствор пирантел тартрата (42,8 мг в 1 л метанола).
Приборы и посуда: камеры для хроматографирования; аппарат для выпаривания растворов; пластинки для хроматографирования «Силуфол»; весы аналитические; делительные воронки на 50 мл; химические мерные цилиндры на 100 мл; конические колбы с притертой пробкой на 250 мл; плоскодонные колбы на 250 и 40 мл; микропипетки на 100 и 200 мкл; водяная баня; аппарат для встряхиванияя; ротационный аппарат.
Ход анализа: измельченную ткань животного происхождения (навеска 10-20 г) помещают в колбу на 250 мл, добавляют 1 мл 0,1 Н HCL и 30 мл ацетона и помещают при периодическом помешивании при 40-50 °С в водяную баню на 30 мин. Экстракт декантируют через бумажный фильтр, помещая в колбу на 250 мл и обезжиривают путем вымораживания. Переэкстракцию проводят путем добавления 0,1 Н HCL, 0,25%-ного раствора хлористого натрия, этилацетата. Верхнюю фазу органического растворителя отделяют, предварительно освободившись от водной фазы путем добавления 5 мл этилацетата (пирантел тартрат переходит в этил-ацетат). Далее проводят хроматографирование в условиях двух-
143
мерной тонкослойной хроматографии. Первая система - эфир : гексан, вторая - ацетон : гексан. Окрашивают хроматограмму FeCl3 и помещают на 15 мин в сушильный шкаф при 60 °С для выявления пятен фиолетового цвета.
Количественное определение пирантел тартрата проводят путем измерения площадей и измерения количества препарата (мкг) по калибровочному графику, предварительно построенного, исходя из заведомо известных концентраций препарата. Кроме того, определение пирантел тартрата возможно путем сравнения площадей пятен пробы и стандарта.
Содержание пирантел тартрата в анализируемых пробах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле А х 2
Х«---------, (2)
Вх 1
где А - содержание пирантел тартрата в стандартном растворе, мкг; В -масса анализируемой пробы, г; 1 - площадь пятна стандартного раствора, мм; 2 - площадь пятна пробы, мм.
6.5. Хлорированные углеводороды
Для исследований брали кусочки печени, сердца, крови, молока и почек массой по 10 г в разные сроки после дачи антитрема в дозе 0,2 г/кг. Затем пробы измельчали, помещали в плоскодонную колбу емкостью 50 см3, добавляют 30 см3 ацетона и экстрагируют препарат 1,5-2 ч при комнатной температуре при периодическом встряхивании, далее колбу с экстрактом оставляют на
24 ч при температуре 2-4 °С. По окончании раствор декантируют через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 250 см . Колбу споласкивают ацетоном. К экстракту добавляют 150 см3 25%-ного хлористого натрия и 30 см3 гексана, тщательно перемешивают содержимое в течение 5 мин. Дают слоям разделиться и переносят содержимое в другую воронку: антитрем экстрагируют гексаном (один раз 30 см ).
