Антигельминтики: фармакология и применение - Архипов И.А.
ISBN 978-585941-305-8
Скачать (прямая ссылка):
^ихС'см
где 8аап - площадь хроматографического пика абамектина в стандартном образце крови; С1 ст - содержание ивермектина в стандартном образце крови, нг/мл; Slcm - площадь хроматографического пика ивермектина в стандартном образце крови.
Полученную зависимость аппроксимировали (достоверность аппроксимации R2>0,98) по уравнению
kf = а х In (С1 ст) + Ь,
139
где а, b - эмпирически подобранные константы; С1 ст - концентрация ивермектина в стандартном образце крови, нг/мл.
Средний коэффициент kf рассчитывают по формуле
HLifc/i kf = —, п
где kfi - коэффициент, соответствующий і-му стандартному образцу крови; п - количество стандартных образцов крови, содержащих ивермектин.
Содержание ивермектина (нг/мл) в исследуемом образце крови находят по формуле
Л о/
° обр обр
С = (ах In (------х kj) + b) -----------,
s4^ S4обр х 0,9
где S1 обр — площадь хроматографического пика ивермектина в исследуемом образце крови; S4^ - площадь хроматографического пика абамек-тина в исследуемом образце крови; а, b - эмпирические константы, вычисленные ранее; kf - средний коэффициент, вычисленный ранее; 0,9 -коэффициент разведения.
Метод определения содержания ивермектина в молоке аналогичен методу определения содержания его в крови, за исключением того, что антикоагулянт (Ыа2ЭДТА) не применяют и пробы молока не центрифугируют.
6.3. Пиперазины
Несмотря на широкое применение в ветеринарии и медицине солей пиперазина методы анализа их в продуктах животноводства разработаны недостаточно. Методы титрации не обладают высокой чувствительностью и избирательностью определения, поэтому их не используют на практике.
Пиперазин гексагидрат поглощает неспецифичной коротковолновой части УФ-спектра, что препятствует его определению с помощью спектрофотометрических методов анализа, жидкостной 140
хроматографии с УФ-детектором и тонкослойной хроматографии с хроматоскопическим определением положения пятен на пластинке. Известны методы анализа пиперазина методом газожидкостной хроматографии в виде нитрозаминов (В.A. Dawson, R.C. Lawrence, 1987) или ацетилированных производных (N. Fresenius,
1988).
И.Е. Шумакович в 1993 г. (отчет ВИГИСа, неопубл.) определяла микроколичества пиперазина гексагидрата в пробах животного происхождения методом реакционной газожидкостной хроматографии с извлечением препарата из проб изопропиловым спиртом и очистки экстракта перераспределением в системе аце-тонитрил-гексан. Нижний предел определения - 0,5 мг/кг. Степень определения - 80±5,0 %.
Реактивы и растворы. Изопропиловый спирт х.ч.; ацетонитрил х.ч.; гексан х.ч.; метанол х.ч.; пиридин ч.д.а.; уксусный ангидрид х.ч.; смесь для ацетилирования (уксусный ангидрид и пиридин) в соотношении 3 : 2; натрий сернокислый безводный
ч.д.а.; стандартный раствор пиперазина гексагидрата безводный
ч.д.а.
Приборы и посуда. Хроматограф «Chrom-5» с плазменноионизационным детектором; хроматографическая колонка стеклянная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм; весы аналитические; гомогенизатор; прибор для встряхивания; вакуумный ротационный испаритель; насос водоструйный; колба коническая на 100 мл; воронки химические; фильтры бумажные; колбы круглодонные со шлифами на 50 и 100 мл; воронки делительные на 250 мл; цилиндры на 100 мл; пипетки на 0,2 и 2 мл; микрошприц на 10 мкл.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Анализируемую пробу животной ткани (мышцы, печень, легкие, сердце и др.) массой 5-10 г (точная навеска) гомогенизируют и помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 20 мл изопропилового спирта и экстрагируют при постоянном встряхивании в течение 60 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 100 мл, а пробу повторно запивают 20 мл изопропилового спирта и экстрагируют при постоянном встряхивании в течение 30 мин. Экстракты объединяют в круглодонной колбе.
Экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе. Остаток последовательно растворяют в 20 мл ацетонитрила и 20 мл гексана и количественно переносят в делительную воронку. После осторожного перемешивания слоям дают разделиться. Верхний гексановый слой отбрасывают. Переэкстракцию с гексаном
141
повторяют дважды. Ацетонитрильный слой переносят через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в круглодонную колбу на 50 мл и упаривают досуха в вакууме при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток ацетилируют, для чего колбу обмывают 0,2 мл метанола и 0,2 мл смеси уксусного ангидрида: пиримидина (3 : 2) и выдерживают 30 мин при температуре 60-70 °С. Продукт реакции упаривают досуха на ротарном испарителе при температуре 70-80 С и растворяют в 0,2 мл метанола. Аналогично ацетилируют 0,2 мл стандартного раствора пиперазина гексагидрата.
Условия хроматографирования: газожидкостной хроматограф типа «Chrom-5» с плазменно-ионизационным детектором; стеклянная колонка длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм; сорбент (0,125-0,15) с нанесенной неподвижной фазой ХЕ-60 (5 % от массы носителя); скорость подачи азота 40 мл/мин.; температура инжектора 245, термостата 210, детектора 250 °С; объем вводимой в хроматограф пробы 2-10 мин; скорость протяжения ленты самописца 0,15 см/мин; время удерживания ацетилирован-ного производного пиперазина 7 мин.
