Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Лисичкин Г.В. -> "Химия привитых поверхностных соединений " -> 284

Химия привитых поверхностных соединений - Лисичкин Г.В.

Лисичкин Г.В., Фадеев А.Ю. Сердан А.А., Нестеренко П.Н. Химия привитых поверхностных соединений — М.: ФИЗМАТЛИТ, 2003. — 592 c.
ISBN 5-9221-0342-3
Скачать (прямая ссылка): himiyprivitihpoverhnostnihsoedineniy2003.djvu
Предыдущая << 1 .. 278 279 280 281 282 283 < 284 > 285 286 287 288 289 290 .. 300 >> Следующая

Однако точное нахождение ^-потенциала не требуется, тик кик но имеющимся данным невозможно восстановить сложную совокупность его определяющих взаимодействий. Более того, достаточно выяснить лишь характер влияния на (?-потенциал количества иммобилизованного белка. Эту оценку можно осуществить косвенно по данным зависимости электрофоретической подвижности от pH, проводя измерения в одинаковых условиях. Иными словами, в одной и той же ячейке подвижность частиц одинакового размера (увеличение которого с нарастанием белковой оболочки в пределах одной серии сорбентов пренебрежимо мало) в буферном
Рис. 9.13. Зависимость количества иммобили- зован-ного белка от концентрации модифи- цирующего белкового раствора
556
Гетероповерхпостные сорбенты и их применение
[Гл. 9
растворе постоянной ионной силы должна определяться только зарядом внешней
поверхности, а этот заряд определяется наличием диссоциирующих функциональных групп, расположенных на поверхности. Величину электрофоретической подвижности измеряли с помощью специальной установки для лазерного электрофореза, включающей собственно прибор, совмещенный с компьютером, который обеспечивает лазерно-оптические сигналы по программе, выполняющей Фурье-преобразование.
Значения изоэлектрических точек для серии сорбентов Сульфо найдены из графиков зависимости А (pH), представленных на рис. 9.14 (для сорбентов 1 и 2 — экстраполированы), и приведены в табл. 9.3. Заметно, что с нарастанием толщины слоя белка (с увеличением п) усиливается экранирование исходной (сорбент 1) поверхности, содержащей сульфогруппы, и наблюдается смещение изоэлектрических значений pH (при которых подвижность частиц нулевая) к изоионной точке альбумина (Р^БСА = 4>7)-
Из приведенных зависимостей видно, что кривые изменения электрофоретической подвижности с изменением pH напоминают кривые кислотно-основного титрования для определения константы диссоциации ионогенного соединения, с той существенной разницей, что благодаря специфичности метода позволяют селективно определять «константу диссоциации» только для поверхности. Сорбенты 4 и 5 с высоким содержанием белка (п ^ 30) имеют значения изоэлектрической точки, практически совпадающие с изоэлектрической точкой альбумина. Это можно объяснить только исчезающе малым влиянием сульфогрупп вследствие полного экранирования исходной сульфоповерхности.
Как видно из приведенных графиков, результаты исследования зависимости электрофоретической подвижности частиц полученных сорбентов от pH дают возможность полуколичественно оценить результаты модифицирования внешней поверхности, хорошо согласуются и независимо подтверждают данные элементного анализа и предположение о предпочтительной многослойной сорбции белка на наружной поверхности частиц сорбента.
9.10. Хроматографическое изучение экранирующей роли гетероповерхности и примеры применения гетероповерхостных сорбентов
Одним из основных требований к гетероповерхностным сорбентам для исследования биологических жидкостей в соответствии с идеей их создания и применения является неспособность к удерживанию белковых макромолекул. И поскольку основным фактором, способствующим выходу белков пробы раньше «мертвого» времени, определенного для небольших молекул, является эффективное экрани-
10-8М2Вс-1
Рис. 9.14. Зависимость электрофоретической подвижности частиц сорбентов серии Сульфо от pH 20 мМ калий-фосфатиого буферного раствора
9.10] Хроматографическое изучение экранирующей роли гетероповерхности 557
рование внешней поверхности и входов в поры, было изучено влияние белковой обшивки методом эксклюзионной (ситовой) хроматографии [13, 99].
При проведении исследования этим способом предполагается, что сорбционные взаимодействия между носителем и макромолекулярными стандартами сведены к минимуму. Таким образом, удерживание на сорбентах с одинаковыми геометрическими характеристиками и плотностью прививки для одинаковых стандартных условий должно совпадать. Модифицирующее покрытие должно защитить внутреннюю поверхность от контакта с молекулами больше определенного размера, тогда они должны практически не удерживаться и выходить из колонки раньше, чем проникающие под защитный экран меньшие молекулы. В то же время фенильные радикалы в полистирольных молекулах способны к специфическому взаимодействию с поверхностью силикагеля, что дает определенный вклад в их удерживание. Чем больше доступная для молекул полистирола поверхность, тем выше должна быть величина удерживания. Зависимости времени удерживания полистирольных стандартов от логарифма их молекулярной массы для сорбентов всех изучаемых серий приведены на рис. 9.15. Из кривых следует что средний диаметр пор для исходного и модифицированного сорбента равны приблизительно 10 и 3,5 нм для 2 и 5, 6 и 3,5 нм для 2 и 4, 4 нм для обоих сорбентов из серии Карбокси и ?5 10 нм для обоих из серии ИДК.
Таким образом, исследование показало, что изменение среднего диаметра пор наиболее отчетливо наблюдается только для сорбентов с наибольшей толщиной белковой обшивки (белки плазмы крови человека), в то время как для сорбентов с меньшими покрытиями (альбумин) кривые практически совпадают с таковыми для исходных сорбентов, поэтому данные для серий Сульфо и ДЕАЕ не приведены. Это, по-видимому, связано с конкуренцией двух противоположных влияний: с одной стороны, с ростом толщины белковой обшивки снижается доступ макромолекул в поры, с другой стороны, макромолекулы полистирола при определенных условиях могут взаимодействовать с внешней доступной белковой обшивкой. При небольшом белковом покрытии второй фактор вносит больший (как в случае с сорбентами Карбокси, рис. 9.15е) или равноценный (в случае других сорбентов) вклад, в то время как с ростом толщины обшивки вклад первого фактора увеличивается и становится определяющим. Изменение удерживания макромолекул полистирола среднего размера только на сорбентах с покрытием из белков плазмы крови может быть связано с тем, что разнообразие форм и размеров белков, составляющих натуральную плазму крови, обусловливает образование более плотного слоя, тогда как покрытие из однородных сравнительно крупных глобул БСА получается рыхлым и проницаемым для молекул большего размера.
Предыдущая << 1 .. 278 279 280 281 282 283 < 284 > 285 286 287 288 289 290 .. 300 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed