Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
2,45 3,60
2,72 3,33
3,25 2,94
Таблица 16
Зависимость времени релаксации системы, содержащей тетрацианоэтилен [AJ, гексаметилбензол [BJ и донорно-акцепторный комплекс от равновесных концентраций реагентов. Условия опыта: температура равна —83° С
IAJ-105, М [В]-10’, м т-106, сек
20,4 4,9 18,6
15,1 11,6 17,0
22,6 3,0 18,3
11,1 3,33 23,3
11,4 19,8 14,4
12,7 31,2 11,8
8,8 51,2 9,6
5,1 61,2 8,4
ратурного скачка. Используя данные табл. 17, определить значения элементарных констант скоростей реакции
ft.
Е + Р^ГЕР. (9.11)
*-»
9-19. Кинетику взаимодействия антител кролика и гаптена (схема 9.10) изучали методом температурного скачка. Используя данные табл. 18, определить значения констант k\ и k-\.
Зависимость времени релаксации реакции (9-11) от суммы равновесных концентраций рибонуклеазы и уридин-З'-монофосфата. Условия опыта: pH 5,5; 25° С; ионная сила 0,2М (КС!)
([EI+ [Р])-1С‘, М т-Ю5, сек
0,55 6,72
0,72 6,10
0,90 5,75
1,20 5,00,
1,60 4,43
1,82 4,10
2,00 3,84
Таблица 18
Зависимость времени релаксации реакции (9.10) от суммы равновесных концентраций антитела и гаптена
([А] +[В] МО», М
т.103, сек
0,62
0,90
1,28
5,25
3,70
2,94
9-20. При изучении методом температурного скачка кинетики связывания профлавина с активным центром а-химотрипсина было обнаружено, что кинетическая кривая является суммой двух экспоненциальных зависимостей. В табл. 19 приведены значения времен релаксации для ряда равновесных концентраций фермента и
Таблица 19
Зависимость времен релаксации комплексообразования профлавина с а-химотрипсином от суммы равновесных концентраций реагентов
( [Е] + [D] )- 10s. М 3,2 5,6 8,0 11,4 18,0 20,0
¦с,-10*, сек 2,3 2,0 1,70 1,65 1,54 1,50
т2-104, сек 1,45 1,25 1,23 0,95 0,72 0,67
красителя. Предложить кинетическую схему комплексообразования и найти значения элементарных констант скоростей реакции.
9-21. При изучении кинетики равновесного связывания INAD-H с глутаматдегидрогеназой методом температурного скачка были
использованы одинаковые начальные концентрации фермента и кофермепта [17]. Полагая, что механизм комплексообразования описывается схемой (9.12), и исходя из данных табл. 20, определить значеиня элементарных констант скоростей реакции
ft.
Е -j- N TZIIl EN. (9.12)
Таблица 20
Зависимость времени релаксации комплексообразования NAD • Н с глутаматдегидрогеназой от суммы начальных концентраций реагентов. Условия опыта: pH 7,94;
22,3° С; 0,5М NaCI; 0,1М трис-буфер; [Е]0 = [N]0
([Е]0 + [N]o)-10», М т- 10:', сек
1,0 2,60
3,5 2,37
7,0 2,06
10 1,92
12 1,82
14 1,70
0-22. В работе [17] с использованием метода температурного скачка изучалось равновесие в системе
*, А? 10]
E^ К~С,:~С2, (9.13)
где Е — глутаматдегидрогеназа; N—NAD-H; G — глутамат; Ci и С2 — промежуточные комплексы. На основании данных предыдущей задачи и табл. 21 определить значения элементарных констант скоростей реакции (9.13).
Таблица 21
Зависимость произведения обратных времен релаксации от суммы равновесных концентраций фермента и кофермента (NAD-Н). Условия опыта: pH 7,94; 22,3° С; 0,5М NaCI;
0,1 М трис-буфер; концентрация глутамата во всех случаях равна 1,6-10-2М
([Е] + [N]) 10s, М ----10-3, сек-г
т,т,
3,0 15,2
3,6 18,0
4,7 21,5
5,8 25,5
6,8 29,0
8,3 35,0
Ответы и решения
9-1 [18]. Для решения задачи необходимо найти функциональную связь между величиной т (см. рис. 90) и начальной концентрацией субстрата [S]0.
Исходя из схемы (9.6), запишем дифференциальные уравнения для концентрации фермент-субстратного комплекса и продукта реакции, а также уравнение материального баланса по ферменту (так как в нашем случае [S]0^> [Е]о)
Ig^MEHSb-^ + ^HES], * (9.14)
= k-2 [ES], (9.15)
[E]0 = [E] + [ES], (9.16)
