Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
1,0 0,179 26,0 4,26
2,0 0,364 28,0 4,50
3,0 0,550 30,0 4,72
4,0 0,742 32,0 4,93
6,0 1,14 34,0 5,15
8,0 1,57 36,0 5,33
10,0 2,00 38,0 5,51
12,5 2,40 39,5 5,65
14,0 2,64 42,0 5,85
16,0 2,96 44,0 6,03
18,0 3,25 46,0 6,20
20,0 3,51 48,0 6,34
22,5 3,84
6-20. Известно, что в промышленном препарате а-химотрипсина обычно содержится примесь трипсина, причем оба этих фермента способны катализировать гидролиз этилового эфира N-бензоил-аргинина. Исходя из данных табл. 17, определить процентное содержание активного трипсина в препарате а-химотрипсина, если в отдельном эксперименте найдено, что для гидролиза этилового эфира Ы-бензол-Ь-аргинина, катализируемого трипсином, /Ст(каж) = = 4-10-6 М; &кат = 29,6 сек-1.
Таблица 17
Зависимость скорости гидролиза этилового эфира 1Ч-бензоил-1.-аргинина, катализируемого препаратом а-химотрипсина, от концентрации субстрата. Условия опыта: pH 7,8; ионная сила
0,1M (NaCI); 25° С; концентрация препарата а-химотрипсина в растворе равна 8,5-10-вМ
[S]o.103, м 7/-106, М-сек '
1,60 0,802
2,00 0,929
2,67 1,10
4,00 1,51
8,00 2,41
6-21. В таблице 18 приведены кинетические данные по изучению ингибирования профлавином гидролиза этилового эфира Ы-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином. Исходя
из двухстадийной схемы ферментативной реакции, предложить механизм ингибирования и рассчитать возможные кинетические и равновесные параметры реакции.
Таблица 18
Влияние профлавина на кинетику гидролиза этилового эфира 1Ч-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином ([Е]0 = 1,73-10~8М)
[11, м [Slo-103, м р-Ю®, М*сек 1 II], м [Slo-lO1, м ®-10*i М-сек '
0 1,25 2,18 6,2-10---5 5,00 2,00
1,67 2,39 10,0 2,50
2,50 2,65
5,СО 2,96
8,6-10-5 1,43 0,725
1 ¦ Ю-s 1,43 1,97 2,00 0,935
1,82 2,18 2,78 1.19
2,50 2,38 5.00 1,67
4,00 2,70 10.00 2,21
6,67 2,92
1,16-10-4 2,00 0,69
3,3-io-s 1,25 1,32 2,50 0,83
1,67 1,56 3,33 1,01
2,50 1,89 5,00 1,32
5,00 2,41 10,00 1,89
10,00 2,80
1,54 -10---4 2,50 0.С25
6,2-10---5 1,25 0,90 3,33 0,785
2,СО 1,24 5,00 1,05
2,50 1,42 10,00 1.59
6-22. В таблице 19 приведены результаты кинетических исследований гидролиза п-хлоранилида Ы-ацетил-Ь-тирозина, катализи-
Таблица 19
Зависимость начальной скорости гидролиза /г-хлоранилида 1Ч-ацетил-1.-тирозина, катализируемого а-химотрипсином, от концентрации субстрата.
Условия опыта: pH 8,0; 25° С; ионная сила 0,1М (KCI);
5% диметилформамида
isio-да, м ^¦Ю7, М-сек ' [S]o-J0s, м гМО7, М-сек 1
5,0 2,04 30 10,3
6,6 2,63 40 12,8
10 3,92 50 15,1
12 4,66 60 17,0
15 5,72 68 18,7
20 7,35 80 20,2
руемого а-химотрипсином, при сравнимых по величине значениях концентраций субстрата и фермента. Определить значения кинетических параметров ферментативной реакции и вычислить величину абсолютной концентрации а-химотрипсина в условиях эксперимента, если значение Vm, определенное при той же концентрации фермента и избытке субстрата, равно 4,1 ¦ 10-6 М-сек-1.
