Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
1,670 0,30 16,50 0,91 122,0 1,49
6-15. В таблице 13 приведена зависимость начальной скорости гидролиза п-нитроанилида Ы-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином, от концентрации фермента [16]. Определить значения кинетических параметров ферментативной реакции, если концентрация субстрата во всех случаях равна 1¦10-4 М.
Таблица 13
Зависимость начальной скорости гидролиза л-нитроанилида М-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином, от концентрации фермента. Условия опыта: pH 6,1; 25° С;
[S]0 = Ы0-4М
1Е ]0 ¦ 10s, М о-Ю*, М-сек---1 [EJo-103, М О-10*, М-сек *
2,580 2,060 0,3350 0,698
2,070 1,840 0,2070 0,501
1,550 1,710 0,2010 0,508
1,037 1,320 0,1205 0,337
0,929 1,320 0,1037 0,328
0,516 0,898 0,0723 0 222
6-16. Зависимость скорости гидролиза п-нитрофенилсульфата от концентрации арилсульфатазы (неочищенного экстракта печени) имела нелинейный характер [17]. После тщательного диализа препарата фермента та же зависимость стала линейной (см. табл. 14). Предполагая, что первоначальное отсутствие пропорциональности между скоростью реакции и концентрацией фермента вызвано наличием конкурентного ингибитора в препарате фермента, найти отношение концентрации ингибитора к концентрации фермента в неочищенном препарате арилсульсЬатазы.
Таблица 14
Влияние концентрации арилсульфатазы на скорость гидролиза я-нитрофенилфосфата до и после диализа препарата фермента
Концентрация фермента, Начальная скорость реакции, Начальная скорость реакции,
уел. ед. катализируемой неочищенным катализируемой очищенным
ферментом, уел. ед. ферментом, уел. ед.
0,20 3.8 5.4
0,25 4,6 6,8
0,40 7,0 11,0
0,50 8,3 13,6
1,00 13,5 27.2
6-17. В работе [18] изучалась кинетика реакции двух конкурирующих субстратов (5а-андростан-3,16-диона и 5а-андростан-3-она)
с одним ферментом — кортизонредуктазой. В ходе эксперимента были определены значения кинетических параметров ферментативной реакции восстановления 5а-андростан-3,16-диона в отсутствие второго субстрата, а также реакции восстановления смеси обоих субстратов при постоянном отношении их концентраций (табл. 15). Определить значения Vm и /С?П(каж) восстановления 5а-андростан-3-она, катализируемого кортизонредуктазой, в отсутствие первого субстрата.
Таблица 15
Значения кинетических параметров восстановления смеси 5а-андростан-3,16-диона (А) и 5а-андростан-3-она (Б), катализируемого кортизонредуктазой, при различных соотношениях концентраций субстратов. Условия опыта: pH 5,2; 25° С; [NAD-H] = 1,45- 10_5М
Соотношение концентраций Vm-10e, М.мин“1 *т(каж)-10‘> М
субстратов в смеси (А + Б)
[Б] = 0 25,3 42,0
[Б]/ А] = 10 2,25 2,24
[Б]/ А] = 30 1,44 0,825
6-18. При изучении кинетики одновременного восстановления смеси 5и-андростан-3,16-диона и 5а-андростан-3-она, катализируемого кортизонредуктазой, концентрация первого субстрата поддерживалась постоянной, а концентрация второго субстрата варьировалась [18]. Используя данные предыдущей задачи, рассчитать, при какой постоянной концентрации 5а-андростан-3,16-диона в смеси субстратов начальная скорость ферментативной реакции будет оставаться постоянной при изменении концентрации 5а-андростан-3-она в любых пределах.
6-19. При изучении кинетики гидролиза /г-нитроанилида L-ала-нина, катализируемого аминонептидазой М в стационарном режиме протекания реакции было найдено, что зависимость начальной скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата имеет вид 5-образной кривой при малых концентрациях /г-нитроанилида [19]. Предполагая, что фермент в условиях реакции претерпевает обратимую изомеризацию с образованием неактивного конформера (Е*, схема 6.27), и исходя из данных табл. 16, определить значения кинетических параметров ферментативной реакции и константу равновесной обратимой изомеризации фермента:
Е* Г=1Е,
Ks
йз
E+S^----ES----- Е + P.
Зависимость скорости гидролиза /г-нитроанилида L-аланина, катализируемого аминопептидазой М, от концентрации субстрата
[S]o.106, м ^¦10®, М-мнн 1 [SJo-lO5, М р-Ю6, М-мин 1
