Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
5,0 4,64
6,0 4,36
7,0 3,45
10 2,60
12 1,84
6-10. В реакции гидролиза метилового эфира п-толуолсульфо-нил-Б-аргинина, катализируемого трипсином, субстрат является одновременно активатором фермента [11]. Исходя из данных табл. 8, предложить схему ферментативной реакции и определить ее кинетические и равновесные параметры, если из экспериментов, проведенных при небольших концентрациях субстрата (0,32—
¦—50-10~5 М), были найдены значения kK;iT = 0,74 сек-1; /Ст(каж) = = 2,7-10-4 М.
Таблица 8
Зависимость скорости гидролиза метилового эфира п-тозил-О-аргинина, катализируемого трипсином, от концентрации субстрата.
Условия опыта: pH 8,0; 25° С; 0,2М KCI и 0,05М СаС12
ISlo, М г//[Е]0, сек ‘ [SJo, м WlElo. сек 1
0,001 0,61 0,026 1,11
0,005 0,84 0,027 1,13
0,010 0,93 0,030 1,12
0,012 0,97 0,032 1,16
0,015 1,02 0,042 1,18
0,020 1,08 0,050 1,21
0,022 1,09 0,100 1,30
0,025 1,10
6-11. При изучении кинетики гидролиза /г-нитроанилида N-бен-зоил-Ь-аргинина, катализируемого трипсином, было обнаружено, что при высоких концентрациях субстрат является также и активатором ферментативной реакции [12]. На основании данных табл. 9 определить кинетические и равновесные параметры реакции, если при изучении кинетики ферментативного гидролиза в области низких концентраций субстрата были найдены значения ^кат = 1>2 сек-1; /Ст(каж) = 3-10—‘1 М.
Таблица 9 Влияние концентрации субстрата на скорость гидролиза /г-нитроанилида 1Ч-бензоил-1.-аргинина, катализируемого трипсином. Условия опыта: pH 8,2; 25° С; 0,05М трис-НС1-буфер; 0,02М СаС12; 1% диметилформамида;
[ Е] о = 2,58-10-7М
lSlo-10\ м WIElo, сек *
0,80 1,6
1,00 1,8
2,00 2,5
3,20 3,2
5,00 3,9
6,15 4,3
10,00 5,9
6-12. В реакции гидролиза н-каприлового эфира ж-оксибензой-ной кислоты, катализируемого карбоксилэстеразой, субстрат является также активатором фермента [13]. На основании данных табл. 10 определить кинетические и равновесные параметры фер-
Таблица 10
Зависимость скорости гидролиза н-каприл-ж-оксибензоата, катализируемого карбоксилэстеразой, от концентрации субстрата.
Условия опыта: pH 8,0; 30° С;
0,01 М трис-НС1-буфер
[ S ]0" Ю3, м V, уел. ед.
8,95 7,70
6,00 6,47
4,60 5,68
3,30 4,83
2,30 3,95
1,85 3,54
1,00 2,51
0,65 1,96
0,30 1,07
ментативной реакции, если значения Vm¦ и Кт(каж) реакции, определенные при невысоких концентрациях субстрата, оказались равными 2,4 уел. ед. и 4-10-4 М соответственно.
6-13. В работе [14] было показано, что метиловый эфир п-то-луолсульфонил-Ь-аргинина является одновременно субстратом и активатором реакции гидролиза, катализируемой трипсином. Исходя из данных табл. 11, определить кинетические и равновесные параметры ферментативного гидролиза, если из экспериментов, проведенных при низких концентрациях субстрата, были найдены значения Кт(каж) — 8-10_6 М; Vm — Ю уел. ед.
Таблица 11
Влияние концентрации метилового эфира п-тозил-Ь-аргинина на скорость гидролиза, катализируемого трипсином. Условия опыта: pH 8,5; 25° С; [Е10 = 2-Ю-8М
[Sb-lCP, М v, уел. ед.
1,0 11.8
2,0 13,3
4.0 16,0
10,0 21,6
50,0 32,7
6-14. При изучении кинетики гидролиза п-нитроанилида L-лизи-на, катализируемого трипсином, было обнаружено, что субстрат является также активатором ферментативной реакции [15]. При низких концентрациях субстрата были найдены значения Кт[ка.т и &кат, равные 5,1 • 10-4 М и 2,95 • 10-3 сек-1 соответственно. Исходя из данных табл. 12, определить значения равновесных и кинетических параметров промотирования ферментативного гидролиза.
Таблица 12
Зависимость скорости гидролиза /г-нитроанилида L-лизина, катализируемого трипсином, от начальной концентрации субстрата.
Условия опыта: pH 8,53; трис-буфер; 25° С; ионная сила 0,1 (СаС12)
|S|„-103, м W[E]o'105, сек ' [S]o-103, м WIE]0-1C5, [Slo-Ю3, М vll Е]о-10>,
сек-1 сек ^
0,210 0,10 2,19 0,35 21,4 0,96
0,274 0,12 3,64 0,40 33,3 1,00
0,325 0,13 7,74 0,58 34,0 1.11
0,520 0,16 10,00 0,69 39,1 1,13
0,750 0,21 12,60 0,73 57,0 1,32
1,140 0,25 16,00 0,80 100,0 1,43
