Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
3. Яковлев В. А. Кинетика ферментативного катализа. М., .Наука', 1965,
стр. 42.
4. Бе рез нн И. В., М а рт и н е к К. „Мол. биол.“, 5, 347, 1971.
5. ButterworthP. J. „Biochim. Biophys. Acta“, 28C, 251, 1972.
6. Березнн И. В., Мартинек К. »Теор. эксп. хнмия“, 3, 458, 1967.
7. В е г е z i n I. V., Kazanskaya N. F., Klyosov A. A. „FEBS Letters",
15, 121, 1971.
8. Hersh L. B., Stark M. J., Worthed S., Fiero М. K. .Arch. Biochem.
Biophys.”, 150, 219, 1972.
9. Унковский Б. В., Черкасова E. М., Луцык А. И., Богат-
ков С. В., Соколова Т. Д., Малина Ю. Ф. .Биохимия*, 37, 1156.
1972.
10. F о 1 k J. Е., Wolff Е. С., S с h i г m е г Е. W., Cornfield J. „ J. Biol.
Chem.“, 237, 3105, 1962.
11. Rosen berry T. L., Bernhard S. A. .Biochemistry", 11, 4308, 197 2
1 Вследствие громоздкости расчетного аппарата данный метод представляет лишь теоретический интерес и, не имея преимуществ по сравнению с классическими методами определения кинетических параметров ферментативной реакции, не может быть рекомендован в качестве альтернативного для обработки реальных систем
12. Kyrtopoulos S. A.. Satchell
276. 383, 1972.
13. Hall P. L., Anderson C. D., Cr
ptivs.“, 153, 162, 1972.
14. Lasch J., Kudernatsch W., H,
1973.
15. Oesch F., Kaubisch N., Jerin;
!0, 4858, 1971. .
16. Porler D. J. T„ Voet J. G., В
Commun. *, 49, 257, 1972.
17. Березин И. В., Коломнйцева
н е к К. „Мол. биол.“, 1, 425, 1967.
18. Антонов В. К., Ив а ни на Т. В.,
„Мол. биол.“, 4, 558, 1970.
19. Brestkin А. P., Rozengart Е.
v а I. N. „Biochim. Biophys. Acta.“, 1
D. P. N. „Biochim. Biophys. Acta',
aw ford G. D. „Arch. Biochem. Bio-
nson H. „Eur. J. Biochem.*, 34, 53,
D. М., Daly J. W. „Biochemistry",
ight H. J. „Biochem. Biophys. Res.
Г. Я-, Левашов А. В., Марти-
Березин И. В., Мартинек К.
V., Samokish V. A., S о b о 1 е-31, 155, 1969.
Глава 6
КИНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДВУХСТАДИЙНЫХ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ,
НЕ ПОДЧИНЯЮЩИХСЯ УРАВНЕНИЮ МИХАЗЛиСА — МЕНТЕН
§ 1. Ингибирование субстратом
Согласно уравнению Михаэлиса — Ментен (5.7), при увеличении концентрации субстрата начальная скорость ферментативной реакции гиперболически возрастает, стремясь к своему предельному значению, называемому максимальной скоростью реакции. Однако в ряде случаев при увеличении концентрации субстрата начальная скорость ферментативной реакции проходит через максимум и затем уменьшается. Обычно подобный тип зависимости v от [S]o можно количественно описать, исходя из предположения об образовании тройного комплекса ES2, не обладающего ферментативной активностью
Ks
e+sz=^es Лен-p. (6.i)
es2
Кинетическая обработка схемы (6.1) обычными способами (см. § 1, гл. 5) приводит к уравнению скорости ферментативной реакции
v -------(6.2)
[SJ02
К s +[S]„+-77T-Ks
Анализ данного уравнения целесообразно проводить раздельно при низких ([S]o <С KS') И высоких ([S]o Ks) концентрациях
субстрата. В первом случае уравнение (6.2) упрощается до классического уравнения Михаэлиса — Ментен
(6-3>
линеаризацией которого в подходящих координатах (см. гл. 5) можно найти значения k2 и As- При высоких концентрациях субстрата уравнение (6.2) примет вид
у = -АВо (64)
1+^г
*s
линеаризация которого в координатах (1/d, fS]0) позволяет найти значения k2 и A s'. Совпадение значений k2, найденных при использовании уравнений (6.3) и (6.4), является доказательством применимости схемы (6.1) для формального описания кинетики изучаемой ферментативной реакции.
Ингибирование субстратом при высоких его концентрациях будет также наблюдаться, если тройной комплекс ES2 будет обладать активностью, но меньшей по сравнению с фермент-субстрат-ным комплексом (р < 1, схема 6.5).
Е + S ;ZZTES ДЕ + Р (6.5)
ES2—-ES + P.
В этом случае скорость ферментативной реакции будет описы ваться уравнением
P&afSJo
[S]„\
-s I
I [EJ. [S]„
——^4n—
А с + [S]o +
к
Для того чтобы определить на опыте, обладает ли ферментативной активностью тройной комплекс ES2, следует построить зависимость экспериментально найденных значений скорости в координатах (v, log [SJ 0) - Симметричный вид полученной колоколообразной кривой указывает на отсутствие ферментативной активности комплекса ES2. Если же правая ветвь графика (при больших концентрациях субстрата) более пологая по сравнению с левой ветвью, это указывает на величину р, отличную от нуля (0<р< < 1, схема 6.5). В этом случае уравнение (6.6) при высоких кон-
