Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
1.0 1,11
0,67 0,85
0,50 0,69
0,04 10,0 2,67
1,5 1,57
1,0 1,28
0,67 0,98
0,50 0,80
0,1 10,0 3,33
1,5 2,18
1,0 1,82
0,67 1,45
0,50 1,19
0,33 10,0 4,17
1,5 3,13
1,0 2,64
0,67 2,22
0,50 1,89
полученное преобразованием выражения (5.11). Находя таким образом величину Vm для всех экспериментальных значений начальной скорости реакции (у) при соответствующих значениях [S]0 и зная величину Кпцкат)/Ут Для изучаемой реакции, можно
ВЫЧИСЛИТЬ Значение Кт(каяк)-
Ь таблице 21 приведены значения максимальной скорости гидролиза дихлориндофенилацетата, катализируемого холинэстеразой, рассчитанные при помощи описанного выше аналитического метода [19] при условии, что котангенс угла наклона касательной к кривой в координатах (и, [S]0) при малых концентрациях суб-
страта равен 0,023 уел. ед.-’М-сек. Очевидно (табл. 21), что вычисленная величина Vm последовательно возрастает с увеличением [S]o- Найти с помощью алгебраических методов выражение для систематической ошибки и определить истинные значения Vm
Таблица 20
Влияние борной и н-гексилборной кислот на кинетику гидролиза n-нитроанилида Ы-(3-карбоксипропионил)-Ь-фенилаланина, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта: pH 8,0; 30° С, ионная сила 0,1 М (NaCl); [S]0 = 1,3-10~4М
[НзВОз], м (С,Н13В (ОНЫ-Ю3, м V
0 1,3 1,45
2,6 2,00
4.0 2.40
5.1 2,75
6.5 3,25
0,21 0 3,70
1,3 4,15
2,6 4,50
4.0 5,05
5.1 5,45
6,5 5,93
и Кт{каш) для данной реакции при условии, что начальные скорости реакции (и) при данных значениях [S] 0 определены с высокой степенью точности. Точность проведения касательной к кривой в координатах (v, [S] о) при [S] о -> 0 невелика.
Таблица 21
Зависимость начальной скорости гидролиза дихлориндофенилацетата, катализируемого холинэстеразой, от концентрации субстрата и значения максимальной скорости реакции, рассчитанные с помощью уравнения (5.44) при условии Кт(к&гк)1Ут = 0,023 уел. ед.-’М-сек. Условия опыта: pH 8,0;
25° С; 0,05 М фосфатный буфер; [Е]0 = 2-10_11М
IS]0-1G«, м о-Ю3, уел. ед./сек 10я, уел. ед./сек
0,2 0,77 3,0
0,6 1,90 5,2
1,0 2,70 5,9
1,5 3.30 6.0
2.0 3,85 6,2
Ответы и решзния
5-1. Ответ: (см. рис. 36): V
= 0,173 сек-ь /Гт(каж) = 8,77-10-*
5-2. Ответ: &ках = 0,32 сек-1;
5-3. Ответ: kKaT = 5,08 сек-1;
5-4. Ответ: &кат = 57,3 сек-1;
5-5. Ответ: &кат = 66,5 сек-1;
5-6. Ответ: (рис. 37): &кат = 2, = 0.04 мг/мл.
? 4.0
v. О
ъК З.о
' CS
ь 2,0
-1 /к " ^ I I ... I I -. -
' 0
V[S]n/o',W
m = 6,58-10-6 М сек-1; Акат = М.
/Ст( каж) = 1,4Ы0-3 М. ^тскаж)^* 1,43-10-2 М.
Кт(каж) = 2,96- Ю-4 М.
/Ст(каж) = 2,13-10-5 М.
92-104 ед-л/сек-моль; /Ст(ка ж)=
V[s] /0,'м*/мг
о
Рис. 36. Определение максимальной скорости н кажущейся константы Михаэлиса для гидролиза метилового эфира 1Ч-ацетил-Ь-ва-лина, катализируемого а-химотрипсином, в координатах Лай-нунвера-Берка
Рис. 37. Определение кинетических параметров гидролиза бактериальных клеток Me. lysodeildicus, катализируемого лизоцимом
5-7. Ответ &кат = 6,53 сек-1; Кт{каж) = 1,85-Ю~2 М.
5-8. Ответ: &кат = 0,109 сек-1; ДГт(каж) = 0,862 М.
5-9. Обрабатывая данные табл. 9 в координатах Лайнуивера-Берка (рис. 38) находим значение Кт (каж) при [I] - - 0 и значения К]п(каж) при двух концентрациях ингибитора. Откладывая найденные значения констант Михаэлиса в координатах (Кт (каж)/Л'°т (каж)* [I]), получим прямую линию, тангенс угла наклона которой равен 1 )К\ ‘
Ответ: К\ = 6.2-10-4 М.
5-10. Из графика в координатах Лайнуивера-Берка (рис. 39) видно, что ингибирование ферментативной активности имеет неконкурентный характер, и прямая в координатах (v0lvi, [I]) указывает на полный неконкурентный тип ингибирования (рис. 40). Для определения величины Ki можно использовать или координаты (v0/vi, [I]), прямая линия в которых имеет тангенс угла наклона, равный l/Кг (рис. 40) или координаты Диксона (рис. 41).
