Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
Таблица 15
Влияние профлавина на гидролиз этилового эфира N-бензоилглицина, катализируемый папаином. Условия опыта: pH - 6,6; 25° С;
ионная сила 0,3M (КС1); 5-10-3М цистеина; 1 - 10~3М ЭДТА, [Е]0 = 1,2-10_вМ
(профлавин]*1С*, М h ---1 *т<Каж)-10Э- М
кат, сек
0 2,29 12,9
0,492 2,32 7,7
3,080 2,44 4,2
5-17. При изучении гидролиза п-нитроанилида L-лейцина, катализируемого лейцинаминопептидазой, было найдено, что добавки катионов Mg2+ приводят к возрастанию каталитической константы, не влияя на величину кажущейся константы Михаэлиса [14] (табл. 16). Предложить кинетическую схему ферментативной реакции в присутствии катионов Mg2+ и вычислить возможные значения кинетических и равновесных параметров реакции.
Таблица 16
Влияние катионов Mg+2 на кинетические параметры гидролиза п-нитроанилида L-лейцина, катализируемого лейцинаминопептидазой.
Условия опыта: pH 8,5; 25° С; [Е]0 = 3,32-10-7М
[Mg2+]-10’, м *кат. сек 1 КтКкаж>ЛОг' М
0 0,572 1,01
0,1 0,745 0,98
0,5 1,37 1,06
10 6,31 0,97
100 10,3 1,00
5-18. В работе [15] было продемонстрировано активирующее действие метирапона на реакцию превращения фенилэтиленоксида в фенилэтиленгликоль, катализируемую эпоксид-гидразой. На основании данных табл. 17 предложить кинетическую схему активации ферментативной реакции и оценнть значения кинетических и равновесных параметров реакции.
Таблица 17
Влияние метирапона на гидратацию стирол-оксида, катализируемую эпоксид-гидразой. Условия опыта: pH 9,0; 37° С
[метирапон]*Ю3, М [Slo ю*, м v, уел. ед.
2,5 1,59
0 2,0 1,35
1,5 1,08
1,0 0,76
2,5 1,84
0,25 2,0 1,52
1,5 1,18
1,0 0,81
2,5 2,00
2,0 2,0 1,63
1,5 1,24
1,0 0,85
5-19. При изучении кинетики анаэробной реакции р-хлоралани-на с оксидазой D-аминокислот было найдено, что цианид-анионы ускоряют реакцию гидрирования фермента при окислении субстрата [16]. Исходя из данных табл. 18, найти значение константы диссоциации комплекса фермент-активатор и величину максимальной скорости ферментативной реакции при избытке цианид-ионов.
Таблица 18
Влияние цианид-анионов на эффективную константу скорости реакции первого порядка гидрирования оксидазы D-аминокислот в реакции окисления |3-хлораланина.
Условия опыта: pH 8,3; 25° С; 0,1М пирофосфата натрия; [Е]0 = 1,4-10~6М; IS]0 = 4-10~2M
[KCN1-10*, М *эфф, сек ’
0 0
1,0 0,013
2,5 0,023
5,0 0,033
7,5 0,036
10,0 0,039
5-20. При изучении кинетики гидролиза пептидного субстрата, катализируемого карбоксипептидазой В, был обнаружен активирующий эффект добавок к-бутанола [10]. Исходя из данных табл. 19, предложить кинетическую схему реакции в предположении двухстадийного механизма действия фермента и рассчитать константу активации н-бутанолом.
5-21. Известно [17], что неконкурентное ингибирование ферментативной активности а-химотрипсина борной кислотой обусловлено взаимодействием ингибитора с имидазольной группой остатка гистидина-57 активного центра фермента. В табл. 20 приведены результаты совместного воздействия борной и н-гексилборной кислот на кинетику гидролиза анилидного субстрата, катализируемого а-химотрипсином [18]. Определить, принимает ли гистидин-57 активного центра фермента участие в связывании н-гексилборной кислоты.
5-22. Авторами [19] был предложен аналитический метод определения параметров /Стлано и Vm ферментативной реакции, согласно которому значение Кт(кат)/Ут, определяемое как котангенс угла наклона касательной к экспериментальной кривой в координатах (v, [S]о) (при малых концентрациях субстрата), подставляется в выражение
1 ___ 1 К/п( каж) 1
V т v V т IS],
Влияние н-бутанола на кинетику гидролиза гиппурил-Ь-аргинина, катализируемого карбоксипептидазой В. Условия опыта: pH 8,0; 23°С, трис-ацетатиый буфер (0.025М); |Е]С = 1,21 • I0 4 мг/мл
[я-бутанол], М [S]„-10‘, м г/-10s, М-мин 1
0 10,0 1,79
1,5 0,92
1,0 0,71
0,67 0,54
0,50 0,43
0,025 10.0 2,44
1,5 1,29
