Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
1а-кетоглутарат1*Ю3, М [SJo-lOS м 1/0-10е, М-мин 1
1,С0 1,67
0,625 1,43
0 0,500 1,33
0,417 1.25
0,264 1,00
1,67 1,67
1,00 1,43
0,6 0,625 1,18
0,500 1,04
0,330 0.83
5,00 1,56
1,67 1,00
3,0 1,00 0,77
0,667 0,57
0,500 0,45
(б-12уВ работе [10] изучали влияние н-бутанола на кинетику реатщш гидролиза сложных эфиров, катализируемых карбокси-пептидазой В. На основании зависимости скорости ферментативной реакции от начальной концентрации субстрата (табл. 11) предложить кинетическую схему реакции (приняв двухстадийный механизм действия фермента) и определить константу ингибирования н-бутанолом.
5-13. В работе [11] было показано, что метйодид 2-пиридинкар-бальдоксима является ингибитором гидролиза 1-нафтилацетата,
Влияние p-изомера бензоата 1,2,5-триметилпиперидола-4 на кинетику гидролиза бутирилхолина, катализируемого холинэстеразой. Условия опыта: pH 7,4; 25° С; фосфатный буфер (0.001М)
[I]-10s, м [SJo-lO*, М V, уел. ед.
10,00 5,55
А 2,50 4,45
и 0,91 2,94
0,50 2,09
10,00 4,77
А С 2,50 3,78
и,о 0,91 2,56
0,50 1,79
10,00 4,00
2,50 3,18
1 ,и 0,91 2,16
0,50 1,49
10,00 2,86
9 О 2,50 2,28
Z, V 0,91 1,52
0,50 1.С6
10,00 2,38
2,50 1,85
о,U 0,91 1,24
0,50 0,87
катализируемого ацетилхолинэстеразой, причем прямые в координатах Лайнуивера-Берка, соответствующие различным концентрациям ингибитора, имеют вид семейства параллельных прямых. Предложить схему ингибирования (приняв двухстадийный механизм ферментативной реакции) и рассчитать константу ингибирования.
5-14. Кофермент А (СоА) является ингибитором реакции, катализируемой фосфат-ацетилтрансферазой [12]:
Ацетил — СоА + фосфат -> Ацетилфосфат + СоА. (5.43) В табл. 13 приведены данные по влиянию СоА на начальную скорость реакции (5.43) при вариации концентраций обоих субстратов. Определить тип ингибирования коферментом по отношению к нуклеотидному (Ацетил — СоА) и неорганическому субстрату и вычислить соответствующие константы ингибирования.
Влияние н-бутанола на кинетику гидролиза гиппурового эфира L-аргинина, катализируемого карбоксипептидазой В. Условия опыта: pH 8,0; 23° С; трис-ацетатный буфер (0.025М); [Е]0 = 6,05-10~6 мг/мл
[н-бутанол], М [S]„-105, м «МО1, М-мин 1
0 10,0 16,7
5.00 12.5
3,33 10.5
2,50 8,8
2.00 7.7
1,67 6.7
0,05 10,0 9,1
5.00 7.7
3,33 6,5
2,50 5.7
2.00 5,0
1,67 4,55
0,15 10,0 5,35
5.00 4,60
3,33 4,07
2,50 3,64
2.00 3,26
1,67 3,00
0,30 10,0 3,33
Влияние метйодидг 5.00 2,94
гидролиза 1-нафтщ 3,33 2,64
ацетилхолинэстераз 2,50 2,38
ионная сила 0,1М 2.00 2,18
1,67 2,00
2-пиридинкарбальд Таблица 12
ацетата, катализиру оксима на кинетику
ой. Условия опыта: емого
NaCI); 1,6% метано pH 6,85; 25° С;
ла
