Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
4,00 9,70
4,00 10,0
2,00 7,77
2,00 7,85
1,33 6,51
1,33 6,41
',С0 5,50
1,00 5,51
0,80 4,80
0,80 4,76
5-6. Определить значения /гкат и Кт(каш) гидролиза бактериальных клеток Me. Lysodeikticus, катализируемого лизоцимом, исходя из данных табл. 6.
5-7. Определить кинетические параметры гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-фенилаланина, катализируемого трипсином, исходя из данных табл. 7.
5-8. При изучении кинетики гидролиза метилового эфира N-ацетил-глицина, катализируемого а-химотрипсином, наряду
Зависимость начальной скорости гидролиза метилового эфира Г.'-ацетил-Ь-аланил-Ь-фенилаланина, катализируемого а-химотрипсином, от концентрации субстрата. Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,!М (КС1);
(Е1о = 1,035 10-8М
[Slo-W, м IV107, м.сек 1
1,530 4,94
1,530 4,98
0,765 4,20
0,765 4,30
0,510 3,74
0,510 3,70
0,383 3,02
0,383 2,99
0,306 3,32
0,306 3,28
Таблица 5
Зависимость начальной скорости гидролиза этилового эфира ГЧ'-транс-цикнамоил-1,-тирозина, катализируемого а-химотрипсином, от концентрации субстрата. Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,)М (КС1);
2% ацетонитрила; [Е]0 = 3,ЫО-еМ
(SJo-10‘, м l/o-107, М-сек-1
3,6 1,94
1,8 1,84
1,2 1,75
0,90 1,67
0,72 1,59
с ферментативным происходит также спонтанный (щелочной и водный) гидролиз субстрата (табл. 8). Определить кинетические параметры ферментативной реакции.
5-9. В работе [8] было показано, что а-кетоглутарат является конкурентным ингибитором реакции окисления М-метил-Ь-глутама-та, катализируемого N-метилглутамат-дегидрогеназой. Определить константу диссоциации комплекса фермент-ингибитор, исходя из данных табл. 9.
5-10. Бензоат 1,2,5-триметилпиперидол-4(|3-изомер) является ингибитором гидролиза бутирилхолина, катализируемого холин-эстеразой [9]. Определить тип ингибирования и найти константу
Зависимость начальной скорости гидролиза бактериальных клеток, катализируемого лизоцимом, от весовой концентрации суспензии субстрата. Условия опыта: pH 4,9 (ацетатный буфер); 25° С; 1Е]С = 5,7210-8М
(51о*Ю5, мг/мл V' Ю3,
ед. опт. плотности/сек
1.17 0,380
1,33 0,396
1,55 0,480
1,87 0,516
2,33 0,650
3,08 0,770
3,73 0,800
5,60 0,914
6,53 1,02
7,46 1,10
8,40 1,11
9,33 1.17
11,2 1,18
15,5 1,31
Таблица 7
Зависимость начальной скорости гидролиза метилового эфира 1^-ацетил-Ь-фенилаланина, катализируемого трипсином, от концентрации субстрата. Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,Ш (КС1); [Е]0 = 1,41 • 10~6М
ISlo-lO*, м Vo-10', М-сек---1
1,00 3,25
1.00 3,41
0,80 2,81
0,80 2,79
0,67 2,45
0,55 2,15
0,55 2,13
0,50 2,01
диссоциации комплекса фермент-ингибитор, исходя из данных табл. 10.
5-11. В некоторых работах за показатель ингибирующей способности эффектора принимают такую концентрацию последнего, которая вызывает уменьшение скорости ферментативной реакции в два раза (Iso)- Найти связь между 150 и Ki для случаев конкурентного и неконкурентного ингибирования.
Зависимость начальных скоростей спонтанного и химотриптического гидролиза метилацетурата от концентрации субстрата. Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,iM (KCI); [Е]0 = 3,82-Ю^М
[Slo. М Начальная скорость спонтанного Суммарная начальная скорость
гидролиза сз'бстрата (в отсутст спонтанного и ферментативного
вие фермента), (М»сек 1)-107 гидролиза, (М*сек---1)-107
1,00 11,9 34,2
0,67 9,31 27,3
0,50 7,88 23,05
0,50 7,90 23,10
0,40 6,45 19,70
0,33 5,88 17,50
0,33 5,78 17,30
Таблица 9
Влияние а-кетоглутарата на кинетику окисления N-метил-L-глутамата, катализируемого N-метил-глутамат-дегидрогеназой. Условия опыта: pH 7,4, 30° С, фосфатный буфер; 3-10~6М 2,6-дихлориндофенола, |Е]о = 6-10-2 мг/мл
