Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
Один из подходов идентификации онкогена состоит в использовании обратной транскриптазы для получения кДНК (рис. 20-31), которая поможет специфически выявить онкогенный участок Такую же кДНК можно в дальнейшем использовать для того, чтобы показать, присутствуют ли невыражающиеся онкогспоподобпые последовательности ДПК в нормаль-
$ РНК + —X1
3' S
Онкоген
HL350 нуклеотидов
+ РНК 3'
у/7/7//,У;»»7777777.
35S-PHK, способная 33S-PH К из неспособной
трансформировать фибробласты вызывал ь трансформацию
разновидности вируса саркомы Рауса (со спонтанной делецией)
Комплементарные 32Р-фрагменты ДНК}
образовавшиеся под действием обратной транскриптазы
т
т
ктуд
L\m 1ЧЧЧМ t\\N IV хЧ
Гибридизация с PH К из нетрансформирующего вируса, которую добавляют в избытке
Т
I
JZZZ21
У777Х 1ЧУЧ 1\\ч
rsssi
Г\УЧ I4VW1 ______________
Н егибридизованный фрагмент, содержащий онкоген
Гибридизация с ДНК из нормальной клетки
т
Хромосомный онкоген, эт а ДНК в нормальных клетках не транскрибируется
Рис. 20-31. Использование обратном транскриигазы для получения ком» лементарных ДНК, специфичных в отношении онкогенов.
пых клетках. Очень важны данные последних экспериментов, показавших, что онкогеноподобные последовательности ДНК, по-видимому, присутствуют во все клетках — и нормальных, и трансформированных. Онкогены нормальных клеток, однако, не транскрибируются в отличие от патологических клеток, в которых они проявляют очень высокую активность.
Таким образом, все больше данных свидетельствует о том, что онко-генность многих, если пе всех, РНК-содержащих опухолевых вирусов
является результатом случайного приобретения ими одного или нескольких «нормальных» генов клетки-хозяина. Следовательно, онкоген мол,от быть геном клетки-хозяина, функционирование которого после внедрения (трансдукцин) в вирусный геном перестает зависеть от эффективных механизмов контроля.
Сейчас мы можем лишь строить догадки о биохимической роли этих потенциально онкогенных нормальных генов. Ключом к разгадке могут стать последние данные о том, что трансформация под влиянием ВСР вызывает синтез гемогдобиновой мРНК в куриных фибробластах. Напротив, нетрансформированные клетки в тон же культуре не стимулируют синтеза гемоглобиповой мРНК. Интересно, что при этом повышается содержание только мРНК, характерных для рапнего периода жизни (мРНК гемоглобина плода). Стимуляции синтеза гемоглобиновон мРНК взрослых животных не происходит. Отсюда следует, что онкогенным «партнером» ВСР может быть ген хозяина (курицы), участвующий во включении большого набора генов, обычно функционирующих только во время эмбрионального развития.
ОПУХОЛЕВЫЕ ВИРУСОПОДОБНЫЕ PIIK-ГЕНОМЫ КАК НОРМАЛЬНЫЕ КОМПОНЕНТЫ КЛЕТКИ
Все клетки позвоночных, по-видимому, содержат от одного до нескольких латентных опухолевых вирусоподобных РНК-геномов, интегрированных с их хромосомами. Эти геномы обычно транскрибируются с очень низкой скоростью, и только изредка от соответствующих поверхностен клеток отпочковываются вирусные частицы. В норме дочерние частицы не способны размножаться в клетках того вида животных, в которых они продуцируются. Напротив, они часто весьма эффективно размножаются в клетках животных других видов. Например, латентный вирус кошек в норме не может размножаться в клетках кошки, но в клетках человека растет очень хорошо. Неспособность эндогенных вирусов размножаться в клетках, где они сформировались, возможно, обусловлена присутствием молекул типа репрессоров, которые специфически ингибируют активность эндогенных геномов, но не могут блокировать выражение чужеродных геномов, так как в норме опи не подвергаются их воздействию.
Выражение некоторых эндогенпых провнрусных геномов значительно усиливается, если соответствующие клетки-хозяева выращивать в присутствии галогенозамещенных ннримидинов. Каким-то образом включение бромдезоксиуридина или иоддезокснуридина в клеточную (провирусцую?) ДНК сводит к нулю нормальный контроль транскрипции провнруса, что приводит к репродукции большого числа зрелых вирусных частиц. Другие эндогенные провирусы активируются, если действовать на клетки определенными стероидными гормонами. Например, обработка эстроге нами значительно увеличивает число РНК-содержащих опухолевых вирусоподобных частиц, присутствующих в клетках матки. В стимулированной гормонами ткани плаценты также обнаруживается множество РНК-содержащих частиц, похожих на опухолевые вирусы.
В отличие от ВСР или вируса лейкоза Раушера эндогенные опухолеподобные РНК-вирусы не являются истшшо опухолевыми. Хотя они очень хорошо размножаются в чужеродных клетках, их вирусные частицы, как правило, не вызывают трансформации и ие содержат онкогенов. Возникновения рака (обычно лейкоза) можно добиться только если вводить восприимчивым животным колоссальное число частиц вируса. Сле довательно, лейкоз или другую форму рака может вызвать лишь крайне редкий вариант вируса, в который случайно включились клеточные гены. Поэтому возникает вопрос, является ли большинство нормальных эндо-
