Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уотсон Дж. -> "Молекулярная биология гена" -> 230

Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.

Уотсон Дж. Молекулярная биология гена — М.: Мир, 1978. — 706 c.
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyagena1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 224 225 226 227 228 229 < 230 > 231 232 233 234 235 236 .. 317 >> Следующая

отходит большое число \ длит впых отроет
относят к эпнте jиалышч клеткам, а другую к фибробластам, это не обязательно означает, что они произошли из эпителиальной или соединительной ткапи соответственно.
Иногда, одпако, присутствие специфических клеточных продуктов позволяет точно установить происхождение определенных клеточных
линии- В частности, легко догадаться о происхождении клеток, которые секретируют специфические гормоны. Клетки из опухолей янчка выделяют апдрогены, а клетки, полученные из опухолей гипофиза, продуцируют АКТГ и гормон роста. Подобным же образом клетки, происходящие от многих опухолей иелепи, выделяют преимущественно основной белковый продукт печени — альбумин. Столь же яспо и происхождение культур иейробластомы (опухоли первиой ткани), поскольку клетки их обладают возбудимыми мембрапами н при определенных условиях питания образуют многочисленные нейриты (рис. 18-j)
Не всо свойства дифференцированных клеток сохраняются у их потом ства, растущего в культуре. При отсутствии отбора по определенным признакам большинство клеточных линии кажутся менее дифференцированными, чем их предшественники in vivo, и часто проявляют черты сходства с «недифференцированными» эмбриональными клетками, характерными для ранних стадии развития. Поэтому клетки многих так называемых «нормальных» линпи сильпо напоминают раковые клетки, мпогие типы которых также соответствуют частично « дедиффер енцир ов а иному» состоянию Например, в большинстве гепатомне образуются иормальпые ферменты печени. Это сравнение покажется еще более убедительным, если мы примем во внимание, что длительный рост клеток в культуре, возможно, обусловлен утратой каких-то механизмов, замедляющих, а иногда и нолностыо тормозящих клеточное деление в соответствующем многоклеточном организме, с чем может быть связано и развитие ракового состояния- Таким образом, выделение многих клеточных линий могло быть результатом отбора мутантных клеток, менее чувствительных к сигналам, прекращающим деление.
РОСТ НА ТВЕРДЫХ ПОВЕРХНОСТЯХ И РОСТ В СУСИЕНЗИИ
Большинство «фибробластов» и «эпителиальных» клеток растут лучше всего тогда (или только тогда), когда они прикреп юны к твердой поверхности и образуют низкие «газоны» из одного или нескольких клеточиых слоев. В оптимальных условиях первичные эпителиальные клетки образуют слои толщиной в одну клетку (мопослой), а в ку льтурах фибробластов клеточные газоны часто состоят из двух-трех слоев клеток. Только в редких случаях мокпо получить такие клеточпые чинии, которые хорошо размножались бы в суспензии Эти линии происходят от опухолевых (трансформированных) клеток; дело, вероятно, в том, что ад1езня выражена у опухолевых клеток слабее, чем у нормальных, которые образуют организованные тканевые массы. Культуры, хорошо растущие в суспензиях, дают значительно больше, кчеток, чем выращиваемые на твердых поверхностях Поэтому в работах по молекулярной биологии позвоночных в качестве объектов обычно используют клетки типа HeLa или КВ, способные расти в суспензиях.
Лимфоидные клетки тоже лучше всего растут в суспепзиях — либо в виде одиночных клеток, либо в виде мельчайших комочков (рис 18-0). Как правило, можно добиться, чтобы покоящиеся лимфоциты делились только в присутствии определенных митогенов (см. стр. oil) или после заражения некоторыми вирусами. Такие тиыин лимфоидных клеток обычно «бессмертны», и их легко получать в количествах, измеряемых граммами. Другие клетки крови все еще очень трудно выращивать в культуре; однако недавнее открытие факторов (см. стр. 549), способствующих дифферен-цировке эритроцитов, граиулоцитов и макрофагов, позволяет надеяться, что в ближайшее время культивирование всех основпых клеточных элементов крови станет стандартной процедурой.
Рис. 18-6 Лимфоидные клетки человека, растущие и суспензии; х 2511. (С любезного разрешения д-ра Дж. Хинка Институт Слоуна Кеттеринга)
РАЗРАБОТКА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Наличие детально охарактеризованных клеточных линий дает возможность ианравтенно подбирать питательную среду, наиболее подходящую для тех или иных клеток позвоночных. Оптимальный рост клеток HeLa и к лоток L до высоких плотностей оказался возможным при ислользова иии полусинтетической среды, состоящей из 13 различных аминокислот, 8 витаминов, смеси неорганических, солем и днализованпон сыворотки человека, с добавлением в качестве источника энергии глюкозы (табл. 18-2). Если клетки, выращиваемые в условиях низкой плотности, отдают в окружающую среду слишком большие количества жизненно важных метаболитов, приходится добавлять еще некоторые вещества (например, серии, инозит и пнруват). Д-тительно пассируемые клеточные линии обычно лучше растут при низких шготпостях, чем только что полученные линии,— возможно,
Таблица 18 2 Состав среды для культивирования клеток тпшш HeLa (по Eagle Science 122, 501 1955)
Ъ-амгнокисчоты (ММ) Виталины (иМ) Соли (ыМ) Другиг КОМПОНЕНТЫ
Аргинин 0.1 Биотин Ю-з ХаС1 100 Глюкоза 5 нМ
ЦисТеин 0 Оо Холни Ю-з КС1 5 Пенициллин *) 0,005%
Предыдущая << 1 .. 224 225 226 227 228 229 < 230 > 231 232 233 234 235 236 .. 317 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed