Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
ПОЛУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР
Вплоть до последнего времени в росте клеток в культуре было много мистического Для успеха, по-видимому, требовалось очень точное соблюдение необходимых условий, по и в этом случае пе каждому удавалось завладеть желанной волшебной палочкой. Долгое время рост мол.по было с уверенностью получать только при использовании кусочков ткани, да и то лишь тогда, когда их имплантировали в весьма неопределенного рода сгустки
кровяной плазмы или эмбриональные эистракты. Бывали случаи, когда такио «тканевые культуры» при отсутствии бактериального загрязнения и регулярной смене питательной среды росли неопределенно долго Хотя неоднократно предпринимались попытки выращивать культуры из диссоциированных клеток, зто очень редко приводило к успеху, пока не начали применять для диссоциации клеточных масс небольшие количества нро-теолитичеекого фермента трипсина. Тогда диссоциированные (первичные) клетки после помещения их в чашку стали хорошо расти при высокой плотности посева. Б то же время первые попытки получить клональный рост одиночных клеток не приводили к успеху. Отдельные клетки в лучшем случае несколько раз делились, а затем неизбежно погибали. Основной причиной этих иеудач в первых опытах по клонированию клеток было то, что большинство первичных клеток позвоночных в условиях культуры «протекают»: жизненно необходимые питательные вещества диффундируют из них наружу. Поэтому рост идет лучше всего при высокой исходной плотности культуры — при этом становится возможным перекрестное питание. Отсюда возникла практика помещения одиночных первичных клеток в очень мелкие капельки культуральной жидкости. Б этом случае значительное разведение веществ невозможно и клетки дают небольшие клоны. Другой способ повышения эффективности клонирования состоит в помещении одиночных диссоциированных клеток на слой «питающих» клеток, стерилизованных большими дозами рентгеновского облучения. Ни одна из таких облученных клеток кормилиц размножаться не может, но все они остаются метаболически активными и высвобождают питательные вещества в количестве, достаточном для того, чтобы большинство высеянных первичных клеток могло образовать видимые простым глазом колонии.
Таблица 18-1 Некоторые свойства наиболее важных ьлеточиых линий
Происхождение Характерные особенности
Эффек
Линия Вид ЖИВОТНО 1 о Морфологи Рост тивность Образо Хромосомный
(в скобках ука в сус- образо
вания
зано нормаль Ткань ческий тип клонов вание на Сор
ное амилоидное клеток зии из отдель опухолей
число хромосом) ных кле
ток. %
зтз Мышь (40) Эндотелиаль Фибробдас- - 50 Ч- Гетероплоид-
ная ты (редко) ный (в раз
ных клетках
различон)(ы<н
да=65)
L Мышь (40) Соединитель То же + 90 Гетероплоид
ная ный (мода-*
=Ъ5)
сна Китайский хо Яичник Эпителиаль + 95 ? Псев ДО ДНПЛО-
ВНК21 мячок (22) ные ИДЦи И
Сирипсьий хо Почка Фиброблас- + 20 Ч- Диплоидные
DSC мячок (22) ты (редьо)
Обезьяна (40) » Эшиеяи- ~ Низкая ? »
альные
МРС Мышь (40) Миелома кост Лимфоид + 0 ? Гетероплоид
ного ыоага ные НЫЦ
КРИ Лягушка (26) Яйцеклетки Эпители --- 0 + Гаплоидный
альные (N = 13)
HeLa Человек (46) Опухоль теп То же + 95 ? 1 етероплоид-
ки матки нык (мода-
= 75)
КВ Человек (40) Опухоль но » » + 95 ? То же
