Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
Почти все такие синтетические полимеры способны соединяться с рибосомами и функционировать в качестве матриц Некоторые полимеры обнаруживают низкую матричную активность- Это однако не обя эательно означает, что в них отсутствуют функциональные последовательности нуклеотидов (кодоны). Их стабая активность может объясняться тем, что почти все основания в них спарены и это лишает их возможности связываться с рибосомами.
ПОЛИ(У) КОДИРУЕТ ПОЛИФЕНИЛАЛАНИН
Поли(У) был первым синтетическим полирибонуклеотидом- у которого удалось обнаружить матричную активность Основания в этом полимере в водных растворах пе спареиы, и потому поли(У) легко соединяется со свободными рибосомами. Он избирательно связывается с молекулами тРНКФси и определяет синтез нолипептидных цепей, состоящих только из остатков фенилаланина, т. е. представляющих собой полифенплаланнп. Этим доказывается, что кодой для фенилаланина построен из трех остатков уридиловой кислоты (УУУ) (кодовое число 3 было получено в генетических экспериментах, описанных в гл 10). Подобным же образом на основе опытов с поли(Ц) и поли(А) было установлено, что кодоном для пролнна служит триплет ЦЦЦ, а для лизина — ААА К сожалению, остатки гуанина в поли(Г) прочно связываются между собой водородными связями, образуя трехцепочечные спирали, пе способные соединяться с рибосомами Поэтому эксперимент такого типа пе позволяет выявить функциональный характер кодона ГГГ.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СОПОЛИМЕРОВ ПОЗВОЛЯЕТ ВЫЯВИТЬ СОСТАВ КОДОНОВ
С молекулу поли(АЦ) может входить восемь разных кодонов: ЦЦЦ. ЦЦА, ЦАЦ, АЦЦ, ЦАА. АЦА, ААЦ н ААА Их котичественное соотношение зависит от отпошения А/Ц. В бесклеточной системе присоединяясь к рибосомам, сополимер АЦ, кроме пролина (ЦЦЦ) и лизина (ААА), стимулирует также включение аспарагипа, глутамина, гистидипа и треонина Величина включения этих аминокислот то'ко зависит от отношения А/Ц в полимер. Поскольку сополимер АЦ, содержащий больше А чем Ц, стимулирует включение аспарагина в значительно большей степени, чем включение гистидина, мы приходим к выводу, что кодон аспарагипа состоит из двух А и одного Ц, а кодон гистидина — из двух Ц п одного А (табл. 13-2). Такие же эксперименты с другими сополимерами позволили определить еще ряд кодонов Однако эксперименты этого рода ие дают возможности выявить порядок основании в триплете. Л1ы знаем папример, что кодон для гистидина содержит 2Ц и 1А, но мы не можем определить, какое из трех возможных сочетаний этого типа — ЦЦА, ЦАЦ ити АЦЦ — является истинным кодоном, так как последовательность нуклеотидов в сополимере имеет случайный характер Более того, делать выводы па основе слабого включения очепь трудно, а потому некоторые кодоны были вообще определены неверно. Опыты с поли(АУ) (1 5) показали, например, что лизин кодируется не только кодоном ААА, но и кодоном, содержащим 2А и 1У. Между тем новейшие эксперименты (см ниже) явно свидетельствуют против присутствия У в каком бы то ни было из кодопов лизина.
Гоолицн 13-2 Включение аминокислот в белки1)
Пррдположи- Рассчитанная 4i стота трмп-и-топ ммя рассчи-
Алпгаокислота включение кодотлы ЗА | 2А1Ц 1Д Ц «Ц
Асиврапш 24 Л оли(АЦ) (5 1) 4/> 0.8 20
Глутамин 24 2А1Ц 20 4 П 2П
Гистидин 6 2ЛЩ 2м 4,0 4
1изпн 100 1АЙЦ 100 100
Пролин 26 ЗА 20 48
Треовин 1А2Ц
ЗЦ
2ЛЩ,
1А2Ц
Аспарагин
Глутамин
Гистидин
Лизин
Пронин
Треовин
Поли{АЦ) (1 5)
5 2А1Ц 3.3 3.3
5 2Л1Ц 3,3 3 3
23 1Л2Ц 10.7 16 7
i ЗА 0,7 П 7
100 1А2Ц,
Щ 1ft 7 83 3 1О0
21 2А1Ц
1А2Ц 3,3 П.,7 20
1) Включение аминокислот и белки наблюдали после добавления статистических сополимеров АЦ к Оесклеточноыу экстракту (см подпись иод рис. |2-|) Включение каждой аминокислот выражено в процентах от максимального Отношение А/Ц с сополимере было использовано длп вычисления частоты распределении данного кодона п полинуклеотиде Относительные частоты а тих кодонов являются функцией вероятности того что какой-ямСо определенный пук 1ГОТид занимает данное ш ложоиие в i оздне ЕС ш например. А Ц = 5 1. то А АА/А АЦ = 15ХэХ5) <5Х5Х1) = 12» 25 Поэтому лринпп частоту для кодона
ЗА в а 100, мы получаем длп кодона 2AITI величину равную .0 Предположительные кодоны можно опре-дпн'гь исходя на t тносительных величин включения аминокислот и рассчитанных пагтот ьопопоя.
