Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 79

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 73 74 75 76 77 78 < 79 > 80 81 82 83 84 85 .. 171 >> Следующая

оснащение ИЭФ в тонких горизонтальных пластинах геля. (Более
животрепещущая тема - это, конечно же, ИЭФ в ультратонких пластинах геля,
поэтому нетерпеливый читатель может обратиться сразу же к разд. 3.2.13.)
ИЭФ в пластинах ПААГ отличается целым рядом достоинств. По-видимому,
самое главное - это исключительное удобство и наглядность сопоставления
при проведении анализа многочисленных образцов в параллельных треках
одного и того же геля вместо множества отдельных трубок. Вероятность
повреждения образца за счет контакта с электролитами (опасность, которая
есть всегда при работе с трубками) в случае ИЭФ в горизонтальных
пластинах оказывается очень малой, поскольку образец можно нанести в
любой точке на поверхность геля. Кроме того, при работе с пластинами
упрощаются многие операции, связанные с регистрацией зон, такие, как
обычное окрашивание, радиоавтография, иммунофиксация и получение реплик
(например, для метода зимограмм; см. далее). Вероятность возникновения
оптических артефактов при фотографировании и сканировании для плоских
гелей значительно ниже, чем для цилиндрических гелей. Пластины легко
высушить на подложке, после чего они становятся весьма удобными в об-
Аналитическое ИЭФ
193
ращении и для хранения. Наконец, плоские гели легче термо-статировать и в
них поддерживается более стабильный градиент pH. Может быть, единственное
преимущество ИЭФ в цилиндрических гелях по сравнению с ИЭФ в
горизонтальных пластинах заключается в возможности фракционирования
чувствительных к кислороду ферментов в строго анаэробных условиях.
На сегодняшний день многие фирмы выпускают аппараты, которые можно
использовать для ИЭФ в пластинах ПААГ с вертикальным и горизонтальным
расположением геля и охлаждающих поверхностей. Я предпочитаю
горизонтальные системы, поскольку в них гель не столь подвержен
механическому напряжению. Для горизонтальных пластин проще осуществляется
установка электродов и больше возможных вариантов внесения образца.
Толщина гелей обычно не превышает 1-2 мм; разделение можно проводить как
вдоль, так и поперек пластины. Отвод тепла, как правило, осуществляется
только через нижнюю поверхность, и электроды можно накладывать прямо на
поверхность геля. Для минимизации испарения жидкости с поверхности геля
его прикрывают специальной, близко прилегающей крышкой. Конструкция
типичного аппарата для разделения в плоском слое показана на рис. 3.10,A
(LKB, Multiphor 2117). Эта модель явилась прототипом большинства других
функционально аналогичных систем. Среди таких систем можно назвать
"двойную камеру" фирмы Desaga, систему для работы в плоском слое (FBE
3000) фирмы Pharmacia и камеры фирмы Bio Rad, модели 1405 и 1415.
Система, предлагаемая фирмой Pharmacia, имеет следующие конструктивные
особенности: (а) винтовые ножки для регулирования уровня, (б) широкий
(25x25 см) алюминиевый охлаждающий столик с тефлоновым покрытием, (в)
подвижные электроды, позволяющие как угодно варьировать размеры геля.
Фирма Bio Rad выпускает две камеры разного размера: модель 1405 с
охлаждаемой рабочей поверхностью 12,5X22 см и модель 1415 с охлаждаемой
поверхностью 12,5x43 см. Интересная особенность этих моделей заключается
в том, что в верхнюю крышку вмонтирована охлаждаемая спираль, немного
выходящая за пределы поверхности геля. Испаряющаяся жидкость
конденсируется на этой спирали, что предохраняет поверхность геля от
запотевания. Все эти аппараты содержат дополнительно боковые электродные
камеры, благодаря которым их можно использовать и для других
электрофоретических методов, таких, как иммунофорез или электрофорез в
ДДС-Na (см. также Righetti et al., 1980). Этим объясняется происхождение
названия Multiphor - многоцелевой прибор для электрофоретических методов
анализа. В настоящее время фирма LKB предлагает еще одну модель -
Ultrophor 2217, очень компактную неглубокую камеру, предназ-
13-1488
194
Глава 3
наченную только для ИЭФ и оснащенную подвижными электродами и очень
плотно пригнанной крышкой (рис. 3.10,?).
Дадим теперь некоторые практические рекомендации по использованию
типичной системы ИЭФ в горизонтальных пластинах геля. Так же как и для
ИЭФ в трубках, при работе с аппаратами различной конструкции возможны
незначительные методические вариации. Точная последовательность операций,
как правило, подробно излагается в инструкциях к соответствующим
аппаратам. Я не стану приводить здесь каких-либо конкретных прописей для
полимеризации гелей, поскольку они могут заметно варьировать в
зависимости от экспериментальной задачи. Общие указания по этому вопросу
приведены в разд. 3.2.8 и 3.2.9. Для большинства горизонтальных систем
гель по-лимеризуют между двумя стеклянными пластинами. Одна из пластин
может быть и пластиковой, например если на поверхности геля требуется
сделать стандартные углубления для внесения образца. Толщина зазора между
пластинами, которые разделены специальной уплотнительной резинкой или
Предыдущая << 1 .. 73 74 75 76 77 78 < 79 > 80 81 82 83 84 85 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed