Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 64

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 171 >> Следующая

других компонентов. Таким образом, с точки зрения препаративных
возможностей системы ИЭФ в геле имеют определенные преимущества по
сравнению с системами ИЭФ в градиенте плотности. В геле-
158
Глава 2
¦образующийся осадок локализован вблизи зоны с данным pi и не загрязняет
другие фокусируемые компоненты.
Учитывая все сказанное выше, а также сегодняшнее состояние развития
различной специальной аппаратуры, я берусь утверждать, что ИЭФ должно
стать одним из основных методов крупномасштабного фракционирования
макромолекул. Прежде чем закончить главу, следует еще раз отметить, что,
несмотря на кажущуюся доскональность, настоящий обзор не в состоянии
охватить все -возможные подходы к препаративному ИЭФ. Кстати, есть еще по
крайней мере один, как мне кажется, весьма революционный подход к
проблеме. Однако поскольку он пока принадлежит к числу "тайных замыслов"
моей лаборатории, то •боюсь, что любознательному читателю придется
потерпеть до следующего издания этой книги.
ГЛАВА 3
Аналитическое изоэлектрофокусирование
Хорошей аналитической системой можно назвать такую систему
фракционирования, которая позволяет добиться высокого разрешения при
минимальных затратах времени и материалов. Желательно, чтобы техническое
оснащение аналитического эксперимента было не слишком сложным, позволяло
анализировать одновременно значительное число образцов и включало удобную
систему регистрации данных. Хотя исторически первые системы колоночного
ИЭФ в градиенте плотности использовались в том числе и в аналитических
целях, они, несомненно, не были приспособлены для рутинного анализа
многочисленных образцов. Для ИЭФ даже в самой маленькой из имевшихся в
продаже колонок объемом 110 мл требовались значительные количества
материала. Кроме того, на проведение одного анализа от начала до конца
уходило, как правило, несколько дней. Собственно фокусирование длилось 2-
3 сут. Последующий анализ фракций, полученных после элюции, был также
весьма продолжительным и трудоемким.
Делались попытки сконструировать колонки меньших размеров, в большей
степени приспособленные для ускоренного аналитического ИЭФ. Было
предложено много остроумных решений, которые, впрочем, по большей части
не нашли широкого применения на практике. Помимо неудобств, связанных с
необходимостью элюции и анализа многочисленных фракций, непригодность
многих систем определялась еще и рядом специфических проблем, возникающих
при работе в жидкостном градиенте плотности. Главным образом это проблемы
конвекционного перемешивания и изоэлектрической преципитации в процессе
ИЭФ, а также диффузии и размывания зон при элюции. Дополнительные потери
разрешения возникали из-за того, что объемы собираемых фракций часто
превышали объемы индивидуальных сфокусированных зон. Некоторые из
указанных проблем удавалось решить с помощью непосредственного
сканирования колонки или пропускания элюата через проточную кювету
детектора. И все же надо признать, что лишь немногие
160
Глава 3
из систем ИЭФ в градиенте плотности характеризуются всем набором
параметров, которые отвечают требованиям быстрого и удобного метода
анализа микроколичеств многочисленных образцов.
В этой главе сначала будут рассмотрены методы аналитического ИЭФ в жидкой
среде, а затем более подробно - системы аналитического ИЭФ в геле,
которые за последнее время приобрели "несравненно большую популярность.
Провести четкую границу между методами аналитического и препаративного
'фракционирования довольно трудно. Строго говоря, любая аналитическая
система, позволяющая выделить фракционируемые компоненты, может быть с
таким же успехом названа препаративной. Понятие о "препаративности"
метода зависит и от конкретных потребностей - или на лабораторном, или же
на промышленном уровне.
Некоторые из описанных ниже систем жидкостного ИЭФ, рассматриваемые здесь
в качестве "аналитических", в масштабах лаборатории могут использоваться
и как препаративные. В настоящем изложении я придерживаюсь некоторого
условного разграничения и отношу системы, работающие на уровне от
микрограммов до миллиграммов образца, к аналитическим, а на уровне от
миллиграммов до граммов - к препаративным.
'3.1. ИЭФ в градиенте плотности
с использованием небольших колонок
Одновременно с развитием техники ИЭФ в гелях некоторые ^исследовательские
группы продолжали разработку новых конструкций колонок малого объема для
ИЭФ в градиенте плотности. В работе Weller et al., 1968, описаны две
небольшие U-об-разные колонки для полупрепаративного ИЭФ: одна колонка
диаметром 1,0 см с рабочим объемом 11 мл, другая - диаметром 1,9 см с
рабочим объемом 33 мл. В этих колонках одно колено (вспомогательное)
заполняется только "нижним" электродным раствором (обычно это католит), а
другое колено (разде--лительное) - рабочим сахарозным градиентом
плотности и поверх него вторым электродным раствором (анолитом). Для
отвода тепла колонку помещают в холодную комнату или в ререзервуар с
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed