Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 51

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 45 46 47 48 49 50 < 51 > 52 53 54 55 56 57 .. 171 >> Следующая

разделительную камеру, 7 - кольцевая перегородка, обеспечивающая
равномерность распределения электрического поля в электролизере;
подшипниковая система соединения вращающегося (8) В' неподвижного (9)
узлов, 10 - уплотнительные кольца, 11 - резиновая прокладка уплотнения
электродного отсека, 12 - одно из 46 монтажных колец, образующих
отдельные ячейки (камеры), разделенные между собой полупроницаемыми
мембранами (13),
14 - отверстие для заполнения или опорожнения каждой отдельной ячейки с
пробкой (15) и уплотнительными кольцами (17), 16 - концентрические
уплотнительные кольца для герметизации стыков между отдельными*
ячейками. (Jonsson, Rilbe, 1980.)
126
Глава 2
кажется, что ввиду колоссальных размеров этого прибора, а также большого
расхода дорогостоящих реактивов на сегодняшний день он скорее подходит
для промышленных процессов, чем для работы в лаборатории.
-2.1.12. Высоковольтное ИЭФ в свободном потоке по Ханнигу
Применение методов разделения в свободном потоке особенно эффективно при
работе с очень большими количествами белков, разделение которых в обычном
аппарате с неподвижной -фазой потребовало бы многократного повторения
процесса. Принцип электрофореза в непрерывном свободном потоке был
впервые сформулирован в работе Barollier et al., 1958, и впоследствии
разработан в работах Hannig, 1961, 1969, 1972. Раз-
Рис. 2.14. Устройство разделительной камеры для аналитического
электрофореза и ИЭФ в свободном потоке. 1 - внесение образца, 2 -
уплотнительные прокладки, 3 - рабочий буфер, 4 - каркас, 5 - охлаждающая
жидкость, 6 - рубашка охлаждения, 7 - кварцевое окошко, 8 - мембрана, 9 -
электродный буфер, 10--электродные каналы. (Hannig, 1978.)
Препаративное ИЭФ
12 Г
делительная камера в аппарате Ханнига образована двумя параллельными
стеклянными пластинами (50X50 см на расстоянии 0,3-0,5 мм друг от друга),
между которыми движется непрерывный ламинарный слой электролита. Здесь не
предусмотрено никакой специальной системы антиконвекционной стабилизации,
электрофорез проводится в свободной жидкости. Такой прибор использовался
главным образом для электрофореза белков, целых клеток, клеточных
органелл и мембранных компонентов. Недавно сообщалось о его использовании
для ИЭФ эритроцитов (McGuire et al., 1980).
В работе Hannig, 1978, описана конструкция другой проточной камеры
меньшего размера со встроенным сканирующим! денситометром, что позволяет
регистрировать положение зон и автоматически определять их подвижность.
Камера в разобранном виде изображена на рис. 2.14. В ячейке (12X12 см)
сверху вниз движется ламинарный слой буфера толщиной 0,3 мм.
Электрическое поле (с напряженностью до 200 В/см) приложено в
направлении, перпендикулярном потоку жидкости-Образец непрерывно подается
в верхнюю часть камеры и вносится в поток буфера. В той же работе Ханнига
было описаш> применение этой системы для ИЭФ овечьих гемоглобинов.
Скорость потока жидкости в этой системе слишком велика по сравнению со
скоростью фокусирования, поэтому один и тот же раствор приходилось
многократно пропускать через камеру до. полного установления равновесия.
Аналогичный прием был использован в системе циклического ИЭФ,
разработанной группой Бьера (разд. 2.1.15).
2.1.13. Высоковольтное ИЭФ в свободном потоке Т •
по Джасту и Вернеру
В устройстве, предложенном Seiler et al., 1970 а, Ь, используется
неплоская вертикальная разделительная ячейка. Ячейка, изображенная на
рис. 2.15, представляет собой U-образный канал, образованный блоками из
оргстекла, охватывающими с трех сторон центральную охлаждаемую
металлическую пластину с тефлоновым покрытием. Электродные блоки, в
которых расположены электродные камеры, находятся позади металлической
пластины. Блоки фиксируются крепежными болтами н образуют очень
компактную систему. В переднем блоке и электродном блоке отверстия для
крепежных болтов широкие (без резьбы), что позволяет с помощью различных
прокладок варьировать толщину разделительного канала. Размеры канала - 36
см в длину, 11 см в ширину. Толщина канала обычно около 0,5 мм.
Конструкция предусматривает простоту сборки электродных отсеков.
Полупроницаемая мембрана плотно прижимается
128
Глава 2
Рис. 2.15. Устройство для изоэлектрофокусирования в свободном потоке.
Показаны сечения двумя параллельными плоскостями на глубине 1 см (I) и на
глубине 2 см (II). 1-передний и 2 - боковые блоки разделительной :ячейки,
3 - алюминиевый блок охлаждения, 4 - полость для циркуляции •охлаждающей
жидкости, 5 - электродные блоки, 6 - электродные отсеки с электродами, 7
- крепежный болт, 8 - винт, регулирующий плотность прижима блоков (5) к
прокладке (9) из силиконированного каучука, 10 - электродные мембраны, 11
- резиновые прокладки, регулирующие толщину канала, 12 - ввод
электродного буфера, 13 - ввод в разделительную камеру рабочего буфера.
(Seiler et al., 1970а.)
прокладкой из силиконовой резины с образованием герметичного стыка. С
Предыдущая << 1 .. 45 46 47 48 49 50 < 51 > 52 53 54 55 56 57 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed