Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 46

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 171 >> Следующая

о разработке системы препаративного ИЭФ в градиенте плотности в короткой
колонке с вертикальным охлаждением. Предложение использовать широкие
короткие колонки с вертикальным теплоотводом было высказано еще в работе
Philpot, 1940. В публикации Rilbe, Pettersson, 1975, сообщалось о
создании двух колонок этого типа, различающихся устройством системы
охлаждения. Обе колонки были небычайно широкие и короткие. В одной из них
расстояние между электродами составляло лишь 1,55 см при площади
поперечного сечения 283,5 см2 и общем объеме 440 мл. Электроды были
изготовлены из сплава палладия (75%) и серебра (25%) в виде пластин,
припаянных к латунным контактам по краям колонки. Теплоотвод
осуществлялся главным образом через поверхность электродов, что приводило
к возник-
8-1488
114
Глава 2
новению в колонке вертикального температурного градиента. Равновесие
достигалось очень быстро, в течение 30 мин, падение напряжения на
завершающем этапе составляло 75 В/см. Ввиду такой своеобразной геометрии
колонки для заполнения и опорожнения ее приходилось переворачивать на
бок. Недостатки этой конструкции заключаются в возможности загрязнения в
результате анодного окисления металла и в быстром размывании
сфокусированных зон в процессе поворота колонки на ЭО^С перед'элюцией.
Другая колонка была устроена аналогично и имела объем 110 мл. Она
оснащалась электродами значительно меньшего размера, изготовленными из
платиновой проволоки. Вертикальное охлаждение осуществлялось через
поверхности целлофановых мембран, отделяющих рабочий объем от электродных
отсеков. Растворы электролитов в этих отсеках охлаждались и
перемешивались. Фокусирование занимало обычно 90 мин, разность
потенциалов к концу процесса достигала 125 В. Заполняли и опорожняли
колонку также в перевернутом положении. В такой колонке за 3 ч удавалось
провести изоэлектриче-ское фракционирование более чем 1 г миоглобина
кашалота в градиенте pH 7-9 (Rilbe, Pettersson, 1975). Основные полосы
(МЫ, pi 7,6, в виде комплекса с Fe2+ и pi 8,3, в виде комплекса с Fe3+)
содержали около 800 мг белка - весьма внушительное количество для ИЭФ в
градиенте плотности. Таким обра-
Рис. 2.6. Схематическое изображение прямоугольной ячейки для ИЭФ в
градиенте плотности. Показаны два альтернативных рабочих положения ячейки
- ¦вертикальное (Л) и горизонтальное (Б). 1-разделительная камера, 2 и 3
- "аклонные трубки с электродами, 4 и 5 - зазоры для заполнения и
опорожнения разделительной камеры. (Jonsson et al., 1980.)
Препаративное ИЭФ
115
зом, главные преимущества колонок данного типа - это очень высокая
допустимая загрузка образцом и сравнительно высокая скорость
фокусирования.
Группа Рильбе в Гётенбурге продолжила работу в том же направлении.
Недавно появилась публикация Jonsson et al.,. 1980, в которой представлен
новый вариант колонки для ИЭФ в градиенте плотности, использующий принцип
последовательного фракционирования в горизонтальном и в вертикальном
положениях. Устройство и функционирование этой системы схематически
показано на рис. 2.6. Объем колонки 112 мл. На первом этапе проводят
быстрое предварительное фокусирование с низким разрешением при
горизонтальном расположении ячейки (длина пути 20 мм). На втором этапе
осуществляют высокоэффективное тонкое разделение компонентов путем ИЭФ в
вертикальном положении (длина пути 112 мм). Ячейка имеет форму
параллелепипеда и оснащена электродными резервуарами особой конструкции,
что позволяет легко переводить ее из горизонтального положения в
вертикальное простым поворотом на 90°. Весь процесс ИЭФ, включая тонкое
разделение в вертикальном положении, продолжается всего лишь 4 ч при
допустимой загрузке образца по меньшей мере около 1 г.
2.1.5. Зонально-конвекционное ИЭФ по Вальмету
В работе Valmet, 1969, был описан принципиально новый метод
препаративного изоэлектрического фракционирования, который получил
название "зонально-конвекционное ИЭФ". Уникальная особенность этого
метода состоит в том, что он не нуждается в использовании какой-либо
антиконвекционной среды. Разделение происходит в цепочке последовательно
соединенных U-образных трубок. Разделительная камера (рис. 2.7) выполнена
из пластика и имеет толщину стенок 1 мм. По конструкции она напоминает
цепочку тизелиусовых ячеек с сечением 3X40 мм. Высота каждой U-образной
ячейки 10 мм. Расстояние между желобками также около 10 мм. Камера
состоит из двух разделительных блоков - лотка и крышки. Лоток сделан в
виде неглубокого ящика прямоугольной формы с гофрированным дном. Нижняя
поверхность крышки имеет аналогичный складчатый профиль. При сборке
камеры "зубцы" крышки попадают в соответствующие "карманы" лотка и
частично вытесняют находящуюся в них жидкость таким образом, что
электрическая цепь в камере замыкается. Электроды расположены в
противоположных концах камеры. Стабилизация сфокусированных зон
достигается за счет эффекта Людвига - Соре (Ludwig, 1856; Soret, 1879).
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed