Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 37

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 171 >> Следующая

амфотерного компонента амфолинов дан-
ного диапазона pH. Так, при работе с амфолинами pH 6-8 стабилизация
достигается при использовании треонина в качестве анолита и гистидина в
качестве католита (Nguyen, Chram-bach, 1977 b).
б. Систему ИТФ с многочисленными буферными компонентами можно легко
превратить в систему ЙЭФ, заменив ведущий
и замыкающий компоненты на сильное основание и сильную кислоту. И
наоборот, ИЭФ может фактически превратиться в
ИТФ при замене электролитов на подходящие (ведущий и за-
82
Глава 1
мыкающий) буферные компоненты (Nguyen et al., 1977 а). Это может
оказаться полезным для препаративного гелевого ИЭФ в электрофоретическом
аппарате с камерой элюции.
Мне кажется, что проведение ИЭФ в градиентах такого типа имеет все-таки
скорее теоретическое, чем практическое, значение. Кроме того, реальная
степень сходства методов ИЭФ и ИТФ еще требует уточнения. Поскольку
близость этих методов была установлена главным образом с помощью БЭФ,
следует вспомнить, что, согласно теории Rilbe, 1976, при фокусировании
неамфотерных буферов никогда не может быть достигнуто1 стационарное
состояние. Слабые кислоты или основания даже после полной потери заряда и
прекращения электрофоретической миграции будут диффундировать через слой
сильной кислоты или сильного основания, который расположен со стороны
анода или катода соответственно. Неясно также, в какой степени
предложенный метод стабилизации градиента применим к различным диапазонам
pH. Тем не менее добавление в систему амфотерных буферов, отличных от
амфолинов, несомненно, может быть весьма полезным для формирования
нелинейных градиентов, которые используются в новом методе - так
называемом ИЭФ в модифицированном градиенте pH (разд. 4.4).
1.11.6. Градиент pH, образованный двумя-тремя амфолитами;
моделирование при помощи ЭВМ
Все рассмотренные выше подходы к ИЭФ были чисто эмпирическими; им явно
недоставало наглядной модели, которая описывала бы вклад индивидуальных
компонентов в образование-градиента. Только сравнительно недавно были
опубликованы результаты блестящего теоретического и экспериментального
исследования этого аспекта проблемы (Bier et al., 1981; Palu-sinski et
al., 1981). Авторы исследовали градиенты pH, образуемые смесью всего
двух-трех амфолитов с известными электрохимическими свойствами в
зависимости от набора физических параметров разделения. Для описания
системы необходимо знать следующие электрохимические характеристики
амфолитов.
а. Коэффициенты подвижности (т) всех компонентов смеси. Должно быть
известно не только значение m электрически нейтральной формы амфолита, но
также подвижность катионной и анионной форм. Разница в значениях m для
катиона и аниона может достигать 5%, например из-за более высокой степени
гидратации карбоксильной группы (Edward, Waldron-Edward. 1965).
б. Константы диссоциации всех компонентов (рК). Для по-лиамфолитов -
только значения р/С, ближайшие к pi.
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
93
Таблица 1.8. Исходные параметры и результаты моделирования процесса ИЭФ
бинарных систем амфолитов (Bier et al., 1981)
Компоненты системы PK1 P*2 АрК ApI Коэффициент ПОДВИЖНОСТИ* 104
Плотность тока, мА/СМ2 Результат
p-AIa-His Arg 6,83 9,04 9,51 12,48 2,68 3,44 2,59 2,30 2,71 0,098
Хороший
p-Ala-His Orn 6,83 8,65 9,51 10,76 2,68 2,11 1,53 2,30 3,11 0,108
>
a-OH-Asn His-Gly 2,31 6,27 7,17 8,57 4,86 2,30 2,68 2,95 2,40 0,08
>
Asp M-АБК 1,88 3,12 3,65 4,74 1,90 1,62 0,98 2,97 3,01 0,40 "
a-Asp-His His 3,02 6,0 6,82 9,17 3,80 3,17 2,67 2,11 2,85 0,079
"
a-Asp-His IsoGln Gly Orn 3,02 3,81 2,35 8,65 6,82 7,88 9,78 10,76
3,80 4,07 7,43 2,11 0,93 3,63 2,11 2,96 4.11 3.11 0,25 0,10
Удовлетво- рительный Хороший
Gly-Gly p-AIa-His 3,15 6,83 8,25 9,51 5,10 2,68 2,47 3,08 2,30
0,08 >
His p-Ala-His 6,0 6,83 9,17 ' 9,51 3,17 2,68 0,58 2,85 2,3 0,18
His His-His 6,0 6,8 9,17 7,8 3,17 1,0 0,30 2,85 1,49 0,384
Плохой
His Ту r-Arg 6,0 7,55 9,17 9,80 3,17 2,25 1,09 2,85 1,58 0,096
Хороший
His-Gly p-Ala-His 5,8 6,83 7,8 9,51 2,02 2,68 1,38 2,40 2,30
0,02
His-His p-Ala-His IsoGln His 6,8 6,83 3,02 6,0 7,8 9,51 6,82 9,17
1,0 2,68 4,07 3,17 0,89 1,74 2,40 2,30 2,96 2,85 6,30
Удовлетворительный 0,09 Хороший
Gly-Gly-GIy His 3,23 6,0 8,09 9,17 4,86 3,17 1,94 2,59 2,85 0,076
Tyr-Arg Arg 7,55 9,04 9,80 12,48 2,25 3,44 2,08 1,58 2,71 0,079
Tyr-Arg Orn 7,55 8,65 9,80 10,76 2,25 2,11 1,02 1,58 3,11 0,108
Tyr-Tyr His 3,52 6,0 7,68 9,17 4.16 3.17 1,99 1,56 2,85 0,06 >
94
Глава 1
в. Изоэлектрические точки (pi) всех компонентов смеси. Из значений pi
и р/С получают значения параметров Др1 и Др/С, которые характеризуют
качество разделения при ИЭФ (см. также Almgren, 1971). Система задается
следующим набором физических параметров: а) размеры колонки (длина и
площадь сечения); б) плотность тока (А/см2); в) начальные (исходные)
концентрации амфолитов.
Если задать все эти характеристики и параметры, то с помощью компьютера
можно получить: а) концентрационные профили (вдоль оси колонки) для всех
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed