Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 18

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 12 13 14 15 16 17 < 18 > 19 20 21 22 23 24 .. 171 >> Следующая

работе Righetti et al., 1975 b. Однако, по данным Haglund, 1975,
аминокислоты содержались в амфолинах, выпускавшихся с 1967 по 1972 г.
Начиная с 1973 г. аминокислоты были исключены из состава поступающих в
продажу препаратов. Одно время (в основном в 1974-1975 гг.) фирма LKB
поставляла [,4С]-меченые амфолины для изучения адсорбционных эффектов, а
также наборы низкомолекулярных амфолитов-носителей для препаративного
разделения пептидов (Gasparic, Rosengren, 1974). К сожалению, насколько
мне известно, эти продукты уже перешли в разряд "раритетов". Примерно в
то же время LKB выпускала
48
Глава 1
амфолины с очень узким рабочим диапазоном pH (охватывающим всего 0,5 ед.
pH вместо обычных 2 ед. pH), например с pH разделения 7>0-7,5 для
фракционирования гемоглобинов или с pH 4,0-4,5 - для разделения
генетических вариантов ai-антитрипсина. В настоящее время и этот вид
продукции перестал поступать в продажу.
1.6.2. Синтез сервалитов (фирма Serva)
Получение и свойства этих амфолитов описано в работах Pogacar, Jarecki,
1974, и Grubhofer, Borja, 1977. Изначально для синтеза использовали
олигоамины ТЭПА и ПЭГА, а также низкомолекулярные полиэтиленимины. Затем
смесь полиаминов стали получать сополимеризацией этиленимина и
пропилендиа-мина с последующей очисткой от компонентов с мол. массой
больше 400. Ход реакции можно проиллюстрировать следующей схемой:
В качестве кислых групп использовали остатки серной и фосфорной кислот,
для введения которых применяли пропансуль-тон1* или Na-винилсульфонат и -
Na-хлорметилфосфонат.
Ниже показана типичная структура сервалитов:
Оптимальных результатов при синтезе статистического набора полиамино-
полисульфокислот удается достичь с использованием пропансультона в
щелочной среде. В этих условиях происходит интенсивное алкилирование
первичных, вторичных и третичных аминогрупп (в последнем случае
получаются производные бетаинового типа). Однако полученные таким образом
1 Внутренний сложный эфир (у-сультон) З-гидрокси-1-пропансульфокис-лоты.
- Прим. перев.
СН2-СН
\2 / '
"\1 / 2 + H2N-CHrCH2-CH2-NR2
H2N-CH2~CH2-N-CH2-CHrCH2-N-CH2"CHrNH2
СН2 СН2
СН.
СН.
NH2
nh2
сн2 сн2
nh2
nh-ch2-ch2-ch-so3h
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
амфолиты характеризуются набором значений pi 2-3,5 и 5,8-9,5 и
практически не содержат компонентов в промежуточной области pH 3,5-5,8.
Этот пробел не удаётся заполнить даже с помощью предварительной
кватернизации аминогрупп диметилсульфатом, повышающей их основность.
Получение амфолитов со значениями pi в диапазоне pH 3,5-5,8 оказалось
возможным только благодаря дополнительному введению слабых кислотных
карбоксильных функций с помощью акриловой кислоты.
Таким образом, сервалиты представляют собой полиамины различной
структуры, содержащие карбоксильные, фосфатные к сульфогруппы. Сервалиты
(которые поставляются также фирмой Bio Rad под названием "биолиты")
поступают в продажу в виде наборов с рабочими диапазонами pH 2-4, 3-5, 4-
6, 5-7, б-8, 7-9, 8-10, 9-11, а также с широким диапазоном pH 2-11. Как и
амфолины, .почти все они поставляются в виде 40%-ных растворов в 25-мл
стерильных флаконах. Сервалиты с pi 2-4, 3-5 и 9-11 выпускаются в виде
20%-ных растворов. Фирма Serva предлагает также технический препарат для
работы в области pH 3-10. Этот препарат имеет интенсивную желто-
коричневую окраску, но по своим рабочим характеристикам при ИЭФ не
уступает очищенным бесцветным препаратам, а стоит при этом значительно
дешевле.
Амфолиты с узким диапазоном pi получают изоэлектриче-ским
фракционированием исходной смеси, содержащей полный набор компонентов со
значениями pi, распределенными по всей доступной области pH. Так,
фракционирование смеси амфолитов pH 2-11 достигалось 20-часовым ИЭФ 2%-
ного раствора в 60-л камере, разделенной на 21 отсек пористыми
керамическими перегородками (Grubhofer, Borja, 1977).
1.6.3. Синтез фармалитов (фирма Pharmacia)
Летом 1978 г. под фирменным названием "Фармалиты" в продажу поступили
амфолиты-носители - представители нового "поколения" амфолитов Сёдерберга
(Williams, Soderberg, 1979; Soderberg et al., 1980). На рис. 1.11
показана гипотетическая структура типичного амфолита, входящего в состав
фармалитов и содержащего семь аминогрупп. Первый этап синтеза фармалитов
- это сополимеризация аминов, аминокислот и дипептидов с эпихлоргидрином.
Выбирая соответствующим образом состав исходной смеси аминов и
аминокислот, удается прямо получить серии амфолитов в пяти различных
узких диапазонах pi. Фармалиты pH 3-10 получают, смешивая фармалиты пяти
узких диапазонов pH. Тем самым совершается операция, как бы обратная
традиционной методике фракционирования
4-1488
50
Глава 1
¦I
СО
И'
NH
I
он он сн2
сн-он
N-СН,- СН-СН,- N-СН,- СН - СН, - N+- Н
2 | г | 2 , 2 |
ОН R6 ОН СН2
СО"
Рис. 1.11. Гипотетическая структура одного из компонентов фармалитов,
содержащего б аминогрупп. R - гидрофильные боковые группы. (Williams,
Soderberg, 1979.)
Предыдущая << 1 .. 12 13 14 15 16 17 < 18 > 19 20 21 22 23 24 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed