Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 17

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 11 12 13 14 15 16 < 17 > 18 19 20 21 22 23 .. 171 >> Следующая

1888. К смеси полиаминов (желательно содержащей в основном ПЭГА)
постепенно добавляют акриловую кислоту (обычно из расчета 1 карбоксильная
группа на 2 атома азота). Реакцию проводят при 70°С до полного
исчезновения акриловой кислоты, как правило не менее 5 часов. С выходом
около 100% получают смесь амфолитов с набором значений р/ и рЛ',
равномерно и с большой плотностью распределенных по всему диапазону pH 3-
10. Синтез идет по механизму реакции Михаэля, т. е. с присоединением
против правила Марковнико-ва и образованием производных р-аминокислот (в
данном случае - p-аминопропионовой кислоты). На рис. 1.10 в общем виде
представлена гипотетическая структура амфолитов этого типа. Приведены
тацже данные о поступающих в продажу наборах амфолитов для проведения ИЭФ
в узких интервалах pH. Фракции амфолитов с узким диапазоном pH, за
исключением крайних областей pH 2,5-4 и 9-11, получают фракционированием
исходной смеси в многокамерном электролизере.
46
Глава 1
(r)
AMPHOLINE- амфолиты-носители
Н Н
...CHj-NI-CHj-CHj-CH - N^-CH2 -1 1 1 5 1 1 1 1 !0 ^ рН
Ди : 3,5-ю
I 2 н ' , -'
СН, - . S"8 •
(r)' ,
NH '
/ ЧСНСН,- СН- соо(r)
снг *'2
Д Алифатические g g.g д
СН2 полиамино- , ,______t l 't
I _г\ поликарбоновые ,---------i
COCK кислоты •----------
3,5-5 5-7 7-9 9-1Т
4-6 8-9,5
, , ,--------------19-11
5-7 8-11
)---------I *------
pH 4-7
У
Рис. 1.10. Строение и состав амфолинов. Вверху слева приведена типичная
структурная формула (алифатическая олигоамино-олигокарбоновая кислота).
Внизу слева изображены фрагменты гипотетических кривых титрования набора
амфолинов. Справа - наборы амфолинов с узким и широким диапазонами pH. (С
любезного разрешения LKB Produkter АВ.)
Диапазон, в котором синтезированные таким способом амфолиты проявляют
буферные свойства, ограничен областью pH 3,5-10, поскольку они
практически не содержат функциональных групп со значениями р/( вне
указанных пределов. Впоследствии Вестербергу удалось разработать
методики, позволившие расширить рабочий диапазон pH фракционирования
(Vesterberg, 1973 с, d). Амфолиты, содержащие гуанидиновые группы,
несмотря на высокие значения pi, оказались непригодными ввиду их
нестабильности в щелочной среде. Было обнаружено, что алифатические
олигоамины, у которых атомы азота в цепи разделены более чем тремя
метиленовыми звеньями, характеризуются большими значениями рК, чем такие
соединения, как ТЭТА, ТЭПА или ПЭГА. Соответственно присоединение
карбоксильных групп к олигоаминам этого типа позволяет получить амфолиты
с более высокими значениями pi (Vesterberg, 1976). Так, у 1,6-
диаминогексана pKi = 10,6 и р/С2=11,7, а у его карбокси-лированного
производного р1= 11,15 (все значения определены при 4|0С). Гомологичные
диамины - 1,4-диаминобутан и 1,5-диаминопентан - обладают сходными
свойствами. Таким образом, амфолины диапазона pH 9-11, вероятно, содержат
на-
Теория и важнейшие аспекты ИЭФ
47
бор карбоксилированных олигоаминов указанного типа. Аналогичный подход
может быть использован для синтеза амфолитов с рабочим диапазоном pH 2,5-
4. В этом случае задача сводится к нахождению подходящих более сильных
кислых функциональных групп. Так, Вестерберг предложил использовать
производные некоторых дикарбоновых кислот, у которых благодаря взаимному
влиянию карбоксильных групп значения p/Ci заметно ниже, а р/Сг выше, чем
у обычных монокарбоновых кислот (Vesterberg, 1976). Например, для
малоновой кислоты (НООС-СН2-СООН) p/Ci = 1,8, а р/С2 = 5,7.
Амфолины обычно поступают в продажу в виде 40%-ных растворов,
расфасованных по 25-мл флаконам в стерильной упаковке. Исключение
составляют амфолины крайних диапазонов pH: 2,5-4 и 9-11, которые обладают
вдвое более высокой электропроводностью и буферной емкостью и поэтому
поставляются в виде 20%-ных растворов. Физико-химические свойства этих
амфолинов свидетельствуют о том, что они не относятся к тому же
"семейству", что и обычные амфолиты Вестербер-га, которые синтезируются в
виде смеси с набором изоточек в диапазоне 3,5-10, а затем разделяются на
фракции с более узким рабочим диапазоном pH (Gelsema et al., 1979;
Bianchi Bosisio et al., 1981). Несмотря на то, что со стороны фирмы-
изготовителя соответствующие сведения не поступали, можно полагать, что
амфолины с диапазонами pH 2,5-4 и 9-11 синтезируются отдельно на основе
специфических наборов олигоаминов и кислот.
В работе Davies, 1970, утверждается, что в амфолинах фирмы LKB область
кислых pH "усилена" путем добавления глутаминовой и аспарагиновой кислот,
а щелочная область - за счет лизина и аргинина, в связи с тем что в ходе
синтеза выход амфолитов для крайних областей pH значительно ниже, чем для
диапазонов, примыкающих к нейтральному pH. Присутствие свободных
аминокислот было непосредственно обнаружено в работе Earland, Ramsden,
1969. На основании изучения спектров дисперсии оптического вращения
растворов амфолинов аналогичное предположение было высказано также в
Предыдущая << 1 .. 11 12 13 14 15 16 < 17 > 18 19 20 21 22 23 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed