Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 150

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 144 145 146 147 148 149 < 150 > 151 152 153 154 155 156 .. 171 >> Следующая

Av - это Ala, а в цепи Gv - Gly (Comi et al., 1979; Saglio et al., 1979).
Согласно Righetti et al., 1980, влияние детергента, вероятно, обусловлено
преимущественным связыванием мицелл детергента с гидрофобным участком
133Met-UILeu в Av-цепях (рис. 5.20). В этом случае остаток 132Lys может
встраиваться в поверхностный слой Штерна мицеллы или даже внутрь мицеллы
детергента. Это фактически приводит к потере одного положительного
заряда, а значит, и к возникновению различий в суммарном заряде у двух
исходно одинаково заряженных цепей. 1
С использованием настоящего метода удалось проследить за "переключением"
биосинтеза с Gv на А7-цепи в процессе развития и созревания эритробластов
(Papayannopoulou, 1981). Метод изоэлектрического фракционирования
глобиновых цепей был успешно использован для пренатальной диагностики р-
та-лассемии (Gianni et al., 1981) при генетическом консультировании
семейных пар в районах с высокой частотой этой аномалии, в частности на
Сардинии. ИЭФ в денатурирующих условиях, т. е. в гелях, содержащих 8 М
мочевину и NP-40, оказалось также весьма эффективным при изучении
гемоглобинов Gower I и Gower II у эмбрионов человека.
В отсутствие детергента оптимальное разрешение а-, ?-, е-, р. и у-цепей
достигается при ИЭФ в диапазоне pH 6-9 (Presta et al., 1982).
Фракционирование глобиновых цепей в группах e-G^ -Ау-б-р и ?-<X2-ai имеет
большое значение для генетических исследований, поскольку эта система
представляет собой один из наиболее подробно изученных примеров
скоординированной
Некоторые применения метода ИЭФ
361
и связанной с развитием организма регуляции экспрессии труп-пы
родственных генов (Weatherall, Clegg, 1981).
Скриннинг гемоглобинов в пробах крови из пупочного канатика. ИЭФ
глобиновых цепей по-прежнему остается наиболее простым и надежным методом
установления гомозиготности и гетерозиготности по р-талассемии.
Единственное неудобство заключается в длительности и громоздкости
процесса подготовки образцов (кислый ацетоновый порошок). В этом смысле
значительно удобнее было бы проводить ИЭФ-анализ интактных образцов НЬ.
Скриннинг на талассемию можно было бы проводить на основе анализа проб
крови из пупочного канатика, в которой могут присутствовать только три
основных компонента - HbF, НЬА и ацетилированный HbF (HbFac). Успешно
проанализировать эту смесь с помощью ИЭФ можно только при хорошем
разрешении компонентов НЬА и HbFac, лишь незначительно различающихся по
изоточке (Drysdale et al., 1971). В работе Cossu et al., 1982, сообщается
о разработке модифицированного варианта ИЭФ, который можно использовать
для массового обследования населения в районах с высокой частотой
наследственной талассемии. В качестве критерия заболевания вместо
отношения р/у, определяемого при ИЭФ глобиновых цепей, в этом варианте
используется отношение HbA/HbFac (или HbF/HbA), которое определяют при
фракционировании нативных гемоглобинов, содержащихся в крови из пупочного
канатика новорожденных. Для повышения разрешающей способности в искомой
области pH к амфолинам диапазона pH 6-8 добавляли эквимолярное количество
амфотерных "разделителей", а именно 0,2 М р-аланин и 0,2 М 6-
аминокапроновую кислоту.
Как видно из рис. 5.21, этот метод позволяет добиться прекрасного
разрешения трех зон. Метод отличается простотой, надежностью в
определении любой степени проявления талассемии; в качестве рутинного
анализа он может быть легко налажен в любом родильном отделении. При
проведении массового обследования на Сардинии было установлено, что все
новорожденные, в пробах крови которых содержание гемоглобина А ниже 10%,
являются гетерозиготными по р-талассемии (Cossu еГ al., 1982).
ИЭФ минорных гемоглобинов. Определение трех минорных гемоглобиновых
компонентов человека имеет особенно важное значение, поскольку контроль
за изменениями их уровня может играть существенную роль при диагностике
некоторых заболеваний. Так, уровень НЬАг (агбг) в крови носителей
признака Р-талассемии примерно вдвое выше, чем в отсутствие этого
признака (Kunkel et al., 1957). HbF (агуг) является основным компонентом
крови плода или новорожденного и лишь в еле-
362
Глава 5
Рис. 5.21. ИЭФ гемолизатов крови пупочного канатика в градиенте pH 6-8 с
добавками 0,2 М (3-аланина и 0,2 М 6-аминокапроновой кислоты. Условия
опыта: Г=6%, С=4%, продолжительность ИЭФ 15 мин при постоянном напряжении
400 В и 90 мин при постоянной мощности 15 Вт и максимальном напряжении
1500 В; содержание белка в образце 20 мкг. Относительное содер-жание НЬА
в образцах: 1-9,1%; 2- 11,4%; 3- 14,7%; 4 - 7,9%; 5 - 31,1%; 6 - 28,9%;
7-18,9%; 9 - 31,3%; 10 - 0%; 13 - 28%; 14 - 34,3%. Образцы 8 и 11 кровь
нормальных взрослых (обратите внимание на полосы НЬАи). Образец 12 -
кровь взрослого, гомозиготного по Р+-талассемии. (Cossu et al.,
1982.)
довых количествах имеется у взрослого. Однако его уровень может заметно
возрастать'при врожденных или приобретенных заболеваниях, в том числе при
Предыдущая << 1 .. 144 145 146 147 148 149 < 150 > 151 152 153 154 155 156 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed