Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Ригетти П. -> "Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение" -> 143

Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение - Ригетти П.

Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение — М.: Мир, 1986. — 399 c.
Скачать (прямая ссылка): izoelektricheskoefokusirovanie1986.djvu
Предыдущая << 1 .. 137 138 139 140 141 142 < 143 > 144 145 146 147 148 149 .. 171 >> Следующая

амфолинов (Righetti, 1980); (б) используемые при ИЭФ амфолиты способны
хелатировать двухвалентные катионы металлов (Galante et al., 1975); (в)
амфолиты-носители склонны к образованию комплексов с полианионами типа
нуклеиновых кислот (Galante et al., 1976), сульфированных и карбоксилиро-
ванных полисахаридов (Righetti, Gianazza, 1978; Gianazza, Righetti,
1978), а также с полипептидами типа полиглутамата или полиаспартата. В
связи с этим следует отметить полученные недавно результаты, выявляющие
pH-зависимый характер связывания амфолитов-носителей с поверхностью
эритроцитов (McGuire et al., 1980). При pH 4 наблюдается прочное
связывание; при pH 5 амфолиты связываются значительно слабее, а при pH 6
практически не связываются с клетками. Аналогичное поведение отмечено и
для ПЭГА - полиамина, фактически представляющего собой основную
(некарбоксилированную) цепь типичных амфолитов-носителей. На основании
подобных резуль-
Некоторые применения метода ИЭФ
341
Рис. 5.6. Гипотетическая модель взаимодействия амфолинов с клеточной
поверхностью. Сегмент молекулы одного из амфолинов представлен четырьмя
протонированными атомами азота основной цепи, которые образуют ионные
связи с четырьмя отрицательно заряженными группами на клеточной
поверхности (возможно, с остатками сиаловой кислоты). Изображенные на
схеме карбоксильные группы амфолита ориентированы по направлению от
клеточной мембраны. При pH 4 эти слабые карбоксильные группы (р/( в
среднем около 4) окажутся протонированы примерно на 50%. Для иаглядностн
кривизна изображенного участка поверхности сильно преувеличена. В
действительности такой небольшой участок (протяженностью всего лишь около
1 нм) можно считать практически плоским. (Me Guire et al., 1980.)
татов в работе McGuire et al., 1980, была предложена модель связывания
амфолитов с клеточной поверхностью. На рис. 5.6 показан сегмент
амфолиновой цепи, в которой четыре расположенных по цепочке атома азота
(отделенных друг от друга диметиленовыми звеньями) образуют ионные связи
с четырьмя отрицательно заряженными группами поверхности (вероятно, с
остатками сиаловой кислоты, а также с сульфогруппами, связанными с
боковыми цепями углеводов). Связывание амфолинов может изменять
поверхностный заряд клеток и, таким образом, отрицательно сказываться на
их стабильности и "жизнеспособности. И в самом деле, уже в ранних работах
группы Шербета (Sherbet, 1978) было обнаружено, что все виды клеток,
фокусирующихся при pH около 5 (асцит Иосиды, асцит Эрлиха, клетки Ру,
клетки HeLa, нормальные клетки печени - pi 4,70-5.30), т. е. в области,
где связывание амфолинов еще ощутимо, после ИЭФ оказываются
нежизнеспособными. Эти наблюдения подтверждаются и данными Hammerstedt.,
1979. Авторы установи-
342
Глава 5
ли, что р1Каж сперматозоидов остается неизменным, если клетки вносят в
колонку с предварительно сфокусированным градиентом на участках с pH 7
или 8, но снижается на целых 2 ед. pH при внесении их в более кислую
область градиента. Это явление можно объяснить или интенсивным
связыванием кислых амфолитов-носителей с клетками, или повреждением
поверхности в кислой области, или десорбцией основных белков, связанных с
углеводами на поверхности головки сперматозоида. В то же время связывание
амфолинов скорее всего должно сопровождаться повышением, а не понижением
pi, что, вероятно, и проявляется в достаточно высоких наблюдаемых
значениях pi каж ДЛЯ многих клеток в диапазоне pH 6,0-6,8. С другой
стороны, при фокусировании в цитратном буфере для большей части клеток
наблюдаемые значения pi попадают в диапазон 3,5-4,7 (Boltz et al., 1978).
Следовало бы провести дальнейшее исследование возможностей применения
этого варианта ИЭФ, поскольку в присутствии цитрата заметно возрастает
ионная сила среды, что препятствует агрегации клеток. Кроме того, сам
цитрат, будучи олигоанионом, не должен связываться с клеточной
поверхностью (Pittz et al., 1977). Предлагалось также проводить ИЭФ
клеток в присутствии "плохих" цвиттерионов, таких, как глицин, таурин или
триметиламинопропансульфокислота, которые способствуют поддержанию
постоянной осмолярности на данном участке градиента pH (McGuire et al.,
1980).
Итак, в свете рассмотренных противоречивых данных можно отметить, что к
процессам разделения и характеристики клеток с помощью ИЭФ следует
подходить с большой осторожностью. Нельзя исключить, что недостатки и
ограничения, свойственные этому методу, в конце концов перевесят его
возможные достоинства.
5.3. ИЭФ ферритинов
Ферритин - повсеместно распространенный белок; в этой форме запасается
железо во всех тканях млекопитающих. В богатых железом тканях, таких, как
печень, селезенка и ретику-лоэндотелиальная система, ферритин содержится
в значительном количестве, а в сердце и почках его уровень существенно
ниже. В небольших, но ощутимых количествах ферритин содержится и в
сыворотке (Drysdale, 1977b).
Ферритин состоит из белковой оболочки (апоферритина) и ядра,
Предыдущая << 1 .. 137 138 139 140 141 142 < 143 > 144 145 146 147 148 149 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed