Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Манк М. -> "Биология развития млекопитающих " -> 76

Биология развития млекопитающих - Манк М.

Манк М. Биология развития млекопитающих — М.: Мир, 1990. — 406 c.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка): biologiyarazvitiyamlekopitaushih1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 70 71 72 73 74 75 < 76 > 77 78 79 80 81 82 .. 162 >> Следующая

следующем. Если у самки на определенной стадии развития или в
определенной ткани активны обе Х-хромосомы, то в пробе женского материала
активность ГФРТ будет вдвое выше, чем в мужской (Х+Х+: X+Y=2: 1). Если
одна Х-хромосома самки инактивируется, значение активности ГФРТ будет
одинаковым в обоих случаях (X+X-:X+Y=1 : 1).
Главным преимуществом методики является возможность одновременно в одной
пробе и в одной реакционной смеси измерять активность Х-сцепленной ГФРТ и
сцепленной с аутосомой аденин-фосфорибозилтрансферазы (АФРТ). Ферменты
ГФРТ и АФРТ родственны в функциональном отношении - и тот и другой
вовлечены в метаболический путь утилизации пуринов в связи с включением
пуриновых оснований в ДНК. Двойной микрометод позволяет вычислить
отношение активно-
1 Marilyn Monk. MRC Mammalian Development Unit, 4 Stephenson Way, London
NWl 2HE, UK.
186
Глава 7
сти Х-сцепленной ГФРТ к активности аутосомной АФРТ и, таким образом,
судить о дозе гена Х-сцепленного фермента. Сопоставление отношений ГФРТ:
АФРТ устраняет ошибки отбора проб и позволяет сравнивать пробы между
собой. В том случае, когда мы имеем дело со стандартными пробами, такими,
как предимплантационные эмбрионы на определенной стадии развития или
известное число клеток, микрометод с достаточной точностью дает значения
активности каждого индивидуального фермента (выраженной на эмбрион или на
клетку).
Результаты применения двойного микроанализа для ГФРТ :
: АФРТ можно представить следующим образом.
1. В ходе раннего развития мыши, до 8-клеточной стадии, возрастание
активности ГФРТ связано с трансляцией запасенной материнской мРНК этого
фермента [1, 2]. У ранних эмбрионов, происходящих из яиц матерей с
генотипом XX, активность ГФРТ вдвое выше, чем у эмбрионов матерей ХО [3].
Использование ингибиторов мак-ромолекулярных синтезов подтверждает
представление о запасенной материнской мРНК, обеспечивающей раннее
возрастание активности ГФРТ [2].
2 К стадии морулы активизируются ГФРТ-гены эмбриона. Женские (XX)
эмбрионы обладают вдвое большей активностью ГФРТ, чем мужские (XY).
Следовательно, на этой стадии развития женского эмбриона активны гены
ГФРТ, связанные с обеими Х-хромосомами [1, 4].
3. Инактивация одной из двух Х-хромосом происходит последовательно:
сначала во внезародышевой трофэктодер-ме, затем в первичной энтодерме и,
наконец, в ткани, из которой разовьется эмбрион [5].
4. Реактивация инактивированной Х-хромосомы происходит в линии женских
половых клеток перед наступлением мейоза [6].
5. В последнее время двойной микроанализ ГФРТ и АФРТ используется для
идентификации самок мыши, являющихся мозаиками в отношении инактивации Х-
хромосомы. Гетерозиготные самки ГФРТ+/ГФРТ- оплодотворялись химерным
самцом, у которого половые клетки произошли от ГФРТ-отрицательных
эмбриональных стволовых клеток: Половина мужского потомства
гетерозиготных самок оказалась ГФРТ-отрицательной [7]. У человека
недостаточность ГФРТ служит причиной синдрома Леша - Най-хана.
6. Чувствительность микрометода оказывается достаточной для диагностики
ГФРТ-дефицитных мужских эмбрионов по анализу одного бластомера 8-
клеточной стадии предимплантационного эмбриона [8]. При этом сам зародыш
Биохимический микроанализ ферментов ГФРТ и ФГК
187
переносят в псевдобеременную приемную мать, чтобы проконтролировать
правильность диагноза. Определение дозы ГФРТ в одном бластомере,
полученном посредством биопсии, позволяет судить и о поле эмбриона [9].
7. Мы использовали микрометод для анализа активности клонированных
генов ГФРТ, введенных в яйца путем микроинъекции. Применение активности
ГФРТ в качестве "свидетеля" дает возможность сделать заключение об
эффективности различных промоторных функций. В этом случае одновременное
измерение уровня АФРТ служит ценным контролем нормального развития
инъецированного яйца.
Преимущество микрометода для анализа ФГК-1 заключается в том, что он
позволяет не только различить две Х-хромосомы, но н измерить уровни их
активности. У мыши Х-зависимый фермент ФГК-1 существует в двух различных
электрофоретических формах: ФГК-1А (обнаружена в популяции дикой мыши
Нильсеном и Чепменом [10]) и ФГК-1Б.
Изознмы ФГК-1 могут быть разделены путем гель-электрофореза и
использованы для количественного определения пропорций клеток,
характеризующихся активностью мужской или женской Х-хромосомы в женском
эмбрионе, гетерозиготном по аллелям Pgk-Ia или Pgk-Ib. Количественная
характеристика обеих изозимных форм может быть получена путем повторного
измерения флуоресценции при реакции окрашивания. Этот метод в высшей
степени чувствителен и выявляет активность яйцеклетки или эмбриона мыши и
даже нескольких клеток различных клеточных линий, выделенных
микрохирургически.
На основании количественного анализа изозимов ФГК были сделаны следующие
выводы относительно характера развития.
1. Х-хромосома, наследуемая по отцовской линии, инактивируется
преимущественно во внезародышевых клеточных линиях - трофэктодерме и
Предыдущая << 1 .. 70 71 72 73 74 75 < 76 > 77 78 79 80 81 82 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed