Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Манк М. -> "Биология развития млекопитающих " -> 73

Биология развития млекопитающих - Манк М.

Манк М. Биология развития млекопитающих — М.: Мир, 1990. — 406 c.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка): biologiyarazvitiyamlekopitaushih1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 67 68 69 70 71 72 < 73 > 74 75 76 77 78 79 .. 162 >> Следующая

тканях для определения потомственных клонов необходим более тонкий
анализ, например анализ дисперсии Грега - Смита. Он широко используется в
экологии растений и был применен к анализу тканей мыши Шмидтом [3].
Частота встречаемости бляшек одного генотипа определяется в каждом
квадрате сетки, накладываемой на ткань: случайное распределение бляшек
даст пуассо-новское распределение числа бляшек на квадрат; неслучайное
пространственное распределение ("образование кластеров", или
"сверхдисперсия") узнается по отклонению от пуассоновского распределения.
Этот подход позволил выявить потомственные клоны в кишечном эпителии и
эндотелии аорты [3].
3. Применение тотальных препаратов для изучения "несбалансированных"
химер. Анализ мозаичных паттернов очень упрощается при использовании
тотальных препаратов ткани (методику изготовления см. в разд. 6). Они
позволяют обойти проблемы экстраполяции от одномерной картины (эпителий
на срезе) к двумерной (эпителиальный слой). С помощью тотальных
препаратов мы получаем возможность изучать пространственное распределение
бляшек на большой площади и выявить паттерн, не узнаваемый на меньшей
шкале. Рисунок расположения бляшек будет даже более четким, если один из
составляющих генотипов находится в меньшинстве; каждая бляшка при этом
представляет индивидуальный клон, и взаимное расположение этих клонов в
потомственном клоне не затушевывается примесью клеток соседнего клона. С
такой ситуацией можно встретиться при работе с "не-слабансированными"
химерами или при введении единичных клеточных маркеров на поздних стадиях
развития. Если используются несбалансированные эмбриональные химеры,
следует иметь в виду, что диспропорция обоих составляющих химеру
генотипов может быть случайной, а может быть и следствием
преимущественного роста од-
Методы маркирования клеток и их применение
179
ного из компонентов, что усложнит объяснение образовавшегося паттерна.
Если несбалансированные химеры появляются часто и этот дисбаланс
характеризуется однонаправленностью, правдоподобность именно такой
интерпретации возрастает.
4. О чем свидетельствуют размеры клона в мышиной ткани? Размеры
сцепленных клонов отражают эффект клеточной пролиферации (и соседство
дочерних клеток), приводящей к формированию клонов большого размера, и
клеточного перемешивания в процессе роста. Относительный вклад каждого
эффекта определить не так просто, поэтому интерпретация окончательных
паттернов, исходя из истории клонов, оказывается весьма неопределенной.
Проблема обсуждается Вестом [40] и Шмидтом [3, 41]. В тканях, которые
были проанализированы, распределение частоты размеров клона оказалось
крайне неоднородным, с преимуществом маленьких клонов и незначительным
количеством очень крупных. Использование в качестве характеристики данной
ткани только клона среднего размера недостаточно: гораздо лучше
описывать ее
медианой и обеими квартилями, верхней и нижней. Асимметричность частоты
распределения свидетельствует о том, что одни клетки образуют клоны
большего размера, чем другие. Таким образом, даже если пренебречь
возможностью преимущественного роста одного из компонентов данной ткани,
на основании того, что, например, минимальный вклад минорного генотипа
составляет 1%, нельзя сделать вывод о том, что вся ткань возникла из 100
клеток-предшественниц. Одна клетка из 100 не обязательно даст 1%
конечного объема ткани. Число потомственных клонов также не укажет на
число клеток-родо-начальниц по двум причинам. Во-первых, предполагается,
что клоны происходят из клеточной смеси, в которой не известны
коммитированные клетки - предшественники данной ткани. Во-вторых, общее
число потомственных клонов в ткани нельзя с уверенностью выводить из
относительных пропорций минорного и мажорного генотипов и числа клонов в
минорном типе, так как существует возможность того, что минорный генотип
находится в невыгодных условиях роста.
180
Глава 6
6. Приготовление тотальных препаратов некоторых эпителиальных тканей
6.1. Оборудование
Пара тонких пинцетов.
Очень тонкие ножницы (т. е. ножницы профессора Кинмота, Macarthy's
Surgical Ltd. Dagenham, Essex, UK)-
Глазное лезвие (Beaver KB-225-063, Downs Surgical Ltd., Mitcham, Surrey,
UK).
Энтомологические булавки (Watkins and Doncaster, Hawk-hurst, Kent, UK).
Чашки Петри с 5-миллиметровым слоем воска на дне (Rai-wax 2, Raymond A.
Lamb, Sunbeam Road, London NW10, UK).
Препаровальный микроскоп с холодным источником падающего света.
6.2. Кишка
1. Отпрепарируйте кишку, отделив прилежащий мезентерий и сосуды.
2. Перережьте в месте соединения подвздошной и слепой кишки и восходящей
толстой кишки.
3. Отрежьте слепую кишку.
4. Поместите в PBS на лед.
6.2.1. Окрашивание поверхности просвете толстой кишки для выявления
поверхностных пвттернов ворсинок и эпителия
1. Начинайте с любого конца. Отрежьте фрагмент кишечника по длине,
составляющей около 2/3 длины восковой чашки (чтобы можно было
Предыдущая << 1 .. 67 68 69 70 71 72 < 73 > 74 75 76 77 78 79 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed