Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
20. label B. U., Naylor S. L., Sagkaguchi A. Y., Bell G. Т., Shows Т. B.
(1983). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 6932.
21. Freshney R. I. (1983). Culture of Animal Cells. Alan R. Liss, Inc.,
New York.
22. Cannizzaro L. A., Emanuel В. E. (1984). Cytogenet. Cell Genet., 38,
308.
23. Roderick Т. H. (1981). In: Genetic Variants and Strains of the
Laboratory Mouse. Green М. C. (ed.), Gustav Fischer Verlag, Stuttgart and
New York, p. 279.
24. Buckle V. J., Mondello V., Darling C" Craig I. W., Goodfellow P. N.
(1985). Nature, 317, 739.
2.5. Rogers A. IF. (1979). Techniques of Autoradiography.
Elsevier/North-Hol-land Biomedical Press, Amsterdam/New York/Oxford.
26. Davisson Af. T. (1981). In: Genetic Variants and Strains of the
Laboratory Mouse. Green М. C. (ed.), Gustav Fischer Verlag, Stuttgart and
New York, p. 317.
27. Buckle V. /., Craig I. IF. (1986). In: Human Genetic Disease - A
Practical Approach. Davies К. E. (ed.), IRL Press, Oxford, p. 85.
28. Malcolm S., Cowell J. K., Young B. D. (1986). In: Human Cytogenetics
- A Practical Approach. Rooney D. E., Czepulkowski В. H. (eds), IRL
Press, Oxford, p. 197.
29. Pardue Af. L. (1985). In: Nucleic Acid Hybridisation - A Practical
Approach. Hames B. D., Higgins S. J. (eds), IRL Press, Oxford, p. 179.
ГЛАВА 6
МЕТОДЫ МАРКИРОВАНИЯ КЛЕТОК И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
Б. А. Дж. Пондер1
1. Введение
В этой главе описываются способы маркирования отдельных клеток, групп
клеток и их клональных потомков в организме животного. Маркированные
клетки используются при решении задач двух типов: во-первых, когда
необходимо выяснить вклад той или иной клеточной линии в формирование
органов или тканей в ходе нормального или аномального развития. Так,
изучение судьбы маркированных клеток, введенных в морулу или бластоцисту,
показало возрастающее ограничение морфогенетических потенций клеток
разных районов предимплантационного эмбриона мыши П1; благодаря включению
нейроэктодермальных клеток перепела в куриный эмбрион были выявлены все
клеточные линии, происходящие из этой ткани [2]; анализ мозаичного
состава взрослых тканей химер, образованных в результате агрегации ранних
мышиных эмбрионов, дал возможность судить об истории клонов в связи с
пролиферацией и перегруппировкой клеток в процессе развития [3]. С
помощью маркированных клеток могут исследоваться и патологические
процессы: например, по клеточному составу опухолей мы можем судить о том,
от одной или нескольких клеток они произошли [4]. Для всех этих
исследований существенным условием является идентичность поведения
меченых клеток поведению немеченых клеток той же ткани. Другими словами,
один из критериев выбора маркера заключается в том, чтобы он как можно
меньше нарушал нормальное поведение клеток.
Второй тип задач, для решения которых могут использоваться клеточные
маркеры, касается типа клеток, в котором экспрессируется мутантный ген.
Например, дефект, связанный с геном рей, вызывающим церебральную атаксию,
экспрессируется в химерах pedjped-"-> дикий тип (см. ниже) только в том
случае, когда клетки Пуркинье имеют мутантный генотип [5]. В принципе
таким образом можно изучать клеточные основы любого фенотипического
различия между линиями мышей. Маркирование клеток дает возможность
ответить на вопрос,
1 В. A. J. Ponder. Institute of Cancer Research, Haddon Laboratories,
Clifton Avenue, Sutton, Surrey SM2 PX, UK.
153
Глава 6
свойственна ли высокая или низкая частота возникновения опухолей клеткам-
мишеням, или она является результатом действия модифицирующих факторов в
другой ткани (например, в иммунной системе). При этом очень важно, чтобы
маркерный генотип не вызывал в клетках плейотропный эффект, т. е. не
обусловливал дополнительных, усложняющих экспериментальную ситуацию
различий.
Идеальный клеточный маркер должен сохранять свою клеточную автономность
(т. е. экспрессироваться только в клетках соответствующего генотипа; это
свойство не должно передаваться соседним клеткам); он не должен влиять на
поведение маркированных клеток; клеточный маркер должен характеризоваться
устойчивой экспрессией во всех клетках исследуемой ткани при различных
физиологических или патологических условиях; наконец, он должен
технически легко выявляться. Желательно, чтобы клеточный маркер
экспрессировался во всех тканях на всех стадиях развития, но, конечно, в
этом нет необходимости, если эксперимент ограничен какой-то определенной
тканью. Что касается химерных тканей, то в идеальном случае
маркированными должны быть обе клеточные популяции, иначе можно прийти к
ошибочному заключению, что все немаркированные клетки принадлежат другой
популяции. Большинство методик маркирования не эффективны на 100%. Если
для задач эксперимента наиболее существенна кдеточная популяция,
представленная очень малым числом клеток, то именно ее и следует
пометить.
Идеальной маркирующей системы не предложено до сих пор. Ниже обсуждаются
достоинства и недостатки наиболее распространенных маркеров.
