Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Манк М. -> "Биология развития млекопитающих " -> 37

Биология развития млекопитающих - Манк М.

Манк М. Биология развития млекопитающих — М.: Мир, 1990. — 406 c.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка): biologiyarazvitiyamlekopitaushih1990.djvu
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 162 >> Следующая

11. Повторите эту процедуру (п. 7-10) с оставшимися децидуомами или с
теми, которые удобно инъецировать. Если инъекционная пипетка
закупоривается децидуальной тканью, замените ее.
12. Возвратите матку в брюшную полость и зашейте стейку тела. Кожу можно
зашить или соединить зажимами.
9. Изготовление стеклянных микрохирургических инструментов
9.1. Стекло
Все инструменты делаются из стеклянных капиллярных трубок. Инъекционные и
удерживающие пипетки сделаны из "тонкостенных" трубок (наружный диаметр-
1,0 мм, внутренний - 0,8 мм), их можно получить от Drummond Scientific
Company, Pennsylvania. Используется натриевое стекло или Ругех; и из
того, и из другого получаются хорошие инструменты, но стекло Ругех легче
моется. Прочные микроиглы делает из "тонкостенных" трубок (н. д. 1,0 мм,
в. д. 0,5 мм) фирма Leitz. Все ка-
Эксперименты с постимплантациоиными эмбрионами мыши
93
гшллярные трубки следует предварительно очистить: на 24 ч погрузить в
хромовую кислоту и тщательно сполоснуть несколько раз дистиллированной
водой. Чистые трубки высушите в сушильном шкафу и храните в
пыленепроницаемом контейнере.
9.2. Оборудование
Все инструменты изготовлены вытягиванием постепенно сужающихся игл,
которые модифицированы таким образом, чго составляют целый набор.
Необходимо иметь два прибора - электродный вытягиватель и микрокузницу.
Электродные вытя-гнватели имеются в продаже. Может понадобиться вариант
прибора, который приспособлен для работы со стандартными
микроэлектродными капиллярными трубками, имеющими диаметр, несколько
больший, чем 1,0 мм.
Удобна микрокузница, сконструированная де Фонбрюном; се можно получить от
Beaudouin (Париж). V-образная нить платиновой проволоки (диаметр 0,3 мм)
с небольшим стеклянным шариком, сплавленным с ее вершиной, должна
подходить к держателю нити. Микроскоп снабжен окуляр-микрометром п дает
увеличение примерно ХЮО.
9.3. Инструменты
Лучшее описание способов изготовления различных: стеклянных инструментов
дал сам де Фонбрюн [33J. Его микрркуз-ница содержит инструкцию,
включающую несколько основных процедур. Процедуры, которыми мы пользуемся
в нашей лаборатории при изготовлении прочных препаровальных игл и
удерживающих пипеток, описаны в табл. 3.13, а пипеток для инъекций--в
табл. 3.14. Рис. 3.11 иллюстрирует эти процедуры, (см. гл. 12, разд.
2.4.)
Иглы можно приготовить простым вытягиванием лейцевско-го капилляра на
электродном вытягивателе, но такие иглы могут повредить ткань, если они
сломаются в процессе работы. Более предпочтительны сплошные (без полости)
иглы; они обладают большей механической прочностью.
Инъекционные пипетки делают точно так же, как и удерживающие, за
исключением того, что их отламывают при меньшем внутреннем диаметре.
Окончательный диаметр инъекционной пипетки будет зависеть от того, что
предполагается инъецировать (в пределах от 1 мкм для внутриклеточных
инъекций до 60 мкм для крупных кусочков ткани). Если нужно перенести
сравнительно крупные кусочки ткани, требующие внутреннего диаметра более
35 мкм, удобно иметь пипетку с заостренным концом. Приспособления для
заострения можно приобрести.
94
Глава 3
Таблица 3.13. Изготовление сплошвых игл и удерживающих пипеток
Сплошные препаровальные иглы
1. Вращая стекло, чтобы диаметр трубки не уменьшился в пламени бунзе-
новской горелки, сплавьте центральную часть капиллярной трубки в сплошной
стеклянный стержень. Отодвиньте трубку от источника нагревания и спустя 1
сек, в течение которой она охладится, вытяните трубку, не уменьшая
наружного диаметра сплавившейся части.
2. Поместите капилляр в электродный вытягиватель. Вытягивайте, чтобы
получить иглу, длина суженной области у которой не менее 5 мм.
3. Для того чтобы игла во время операции шла параллельно дну чашки, в
которой проводят опыт, в трубке целесообразно сделать два изгиба, как
показано на рис. 11, Г, 1, с помощью микрогорелки. Для ее изготовления
необходимо прикрепить к концу отводящей газовой трубки инъекционную иглу
от шприца. Если при сплавлении капилляра на одной стороне инструмента
образуется заметное плечо из сплошного стекла, первый изгиб делайте к
этому плечу, отчего в инструменте окончательной формы он будет направлен
от дна чашки.
4. Наконец, силиконируйте иглу, погрузив ее конец в Repelcote (Hopkin and
Williams).
Удерживающая пипетка
1. Используя "тонкостенный" капилляр, вытяните иглу на электродном вытя-
гивателе. Введите иглу в лейцевский инструментальный держатель и
установите ее горизонтально на микрокузнице.
2. Поместите нить и горизонтальный стержень иглы (в области, где ее
внутренний диаметр равен 80 мкм) в одну фокальную плоскость поля зрения
микроскопа.
3. Нагревайте нить до тех пор, пока не начнет плавиться стекло (рис. 11,
Л, 1), после чего приподнимите ее так, чтобы кончик сплавился с важней
стороной капилляра (рис. 3.11, А, 2). При этом старайтесь не повредить
или ие изогнуть капилляр.
4. Прекратите нагревание нити. Сжатие охлаждающейся нити вызовет
Предыдущая << 1 .. 31 32 33 34 35 36 < 37 > 38 39 40 41 42 43 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed