Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
2,0
10-й день (П. П.) 13 21-29 сомитов. Почка передней конечности.
Задний нейропор открыт. 3 жаберных дуги. Глазные бокалы. Утолщенная
обонятельная плакода 3,0
11-й день (У.) 14 30-34 сомита. Почка задней конечности. Нервная
трубка замкнута 4,0
11-й день (П. П.) 15 35-39 сомитов. Выросты почек конечностей.
Удлиненный хвост. Выделяются мозговые пузыри. Обонятельная ямка. Пупочная
грыжа 5,0
') См. [7].
s) (У.) - утро, (П. П.) - после полудня.
3) Размеры эмбрионов с 6-го по 8-й день оценивали, измеряя наибольший
диаметр (d) и высоту (h) эмбриональной области плода; величину эмбрионов
с 9-го по 11-й день - по краниокаудальному размеру.
Эксперименты с постнмплантацноннымн эмбрнонамн мышн
73
Таблица 3.3. Выделение заднего отдела первичной полоски
1. Расположите эмбрион при помощи стеклянных нгл так, чтобы его длинная
ось была перпендикулярна осям нгл.
2. Удерживая левой нглой эмбрион от движения, положите другую иглу
поперек места соединения зародышевой части с внезародышевой вдоль
предполагаемой лнннн разреза (рис. 3.3, А, 1) Прижмите иглы, пока они не
коснутся дна чашки. Двигайте иглы вперед-назад, пока эмбрион не
разделится на две части. Если нужно, повторите эту манипуляцию несколько
раз, используя каждую иглу. Разъедините обе части, отделив, если
требуется, от дна чашки.
3. Ориентируйте зародышевую часть цилиндра так, чтобы первичная полоска
оказалась параллельной длинной оси нглы.
4. Сделайте продольный разрез так, как было описано выше, н как можно
ближе к заднему концу (рис. 3.3, Л, 2).
5. Сделайте поперечный разрез на нужном уровне по оси первичной полоски
(рис. 3.3, А, 3). Отрезанный фрагмент станет плоским, и его боковые
крылья можно отделить, сделав еще два разреза по обе стороны от полоски
(рис. 3.3, Л, 4). Энтодерму н большую часть мезодермы можно удалить,,
осторожно подцепив ткань кончиком нглы.
6. Перенесите фрагмент первичной полоски в стеклянную камеру,
воспользовавшись тонкой, вручную вытянутой пастеровской пипеткой. Чтобы
избежать прилипания эмбрионов к стеклу, для переноса эмбрионов или нх
частей из одного раствора в другой рекомендуется пользоваться снлико-
нированными пастеровскими пипетками (Repelcote; Hopkin and Williams). Их
адгезнвность можно уменьшить и применением охлажденной среды.
живаться, - разделять эмбрион на все более мелкие фрагменты, сохраняя при
этом возможность идентификации того, что нужно получить.
4.2. Ферментативное разделение тканей
Разделения зародышевых слоев можно добиться с помощью протеолитических
ферментов в сочетании с микрохирургической техникой. Наиболее эффективная
методика, предложенная Левак-Свейджер [8], использует смесь трипсина с
панкреатином, позволяя не только чисто разделить ткани, но и уменьшить их
адгезивность, затрудняющую различные манипуляции [9]. Методика
ферментативного разделения описана в табл. 3.4 и проиллюстрирована рис.
3.3, Б\ 8-дневный эпибласт, выделенный этим способом, представлен на рис.
3.4. Метод может быть использован для разделения многих тканей, даже из
достаточно далеко продвинутого в своем развитии эмбриона, если период
инкубации варьирует в зависимости от задачи экспериментатора. Например,
висцеральный желточный мешок может быть разделен иа составляющие его
энтодерму и мезодерму через 3 ч инкубации при 4°С [10].
74
Глава 3
2
3
11
4 m.
4
?
2
3
4
Рис. 3.3. А. Выделение задней части первичной полоски с помощью
микрохирургических методов. Подробное описание процедуры представлено в
табл. 3.3. Б. Микрохирургическое и ферментное отделение эпибласта. Детали
метода
описаны в табл. 3.4.
Дифференцировку или дальнейшее развитие тех или иных фракций части
эмбриона можно изучать в культуре. При этом используются разнообразные
среды и субстраты, но здесь они обсуждаться не будут, так как большинство
соответствующих экспериментов основано на обычной технике культивирования
тканей и органов, сведения о которой можно получить из специальных
источников [11J. В общем условия культивирования определяются задачами
эксперимента. Стандартная техника культивирования тканей и органов меняет
взаимоотношения тканевых пластов и, следовательно, применима в таких
экспериментах, где нарушения морфогенеза не имеют существенного значения.
Отклонения в морфогенезе могут быть даже использованы при выделении тех
или иных клеточных типов из эксплантата гетерогенной или полипотентной
ткани. Например, клетки нервного гребня могут быть выделены в результате
эксплантации изолированной нервной трубки 9-дневного эмбриона в
стандартных тканевых культуральных чашках (Falcon), содержащих
минимальную среду Игла + 15% ЭТС+ 2-4%-ный экстракт зародыша цыпленка
[12]. Спустя несколько дней
5. Культивирование и эктопические трансплантации изолированных тканей
и фракций
5.1. Культивирование
Эксперименты с постимплаитациоиными эмбрионами мыши
75
Таблица 3.4. Выделение эктодермы, мезодермы и энтодермы мышиного эмбриона
на стадии первичной полоски
