Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
также в связи с их спермицидностью. Пациент не должен пытаться собрать
образец, прервав коитус, так как при этом может быть потеряна первая
наиболее богатая сперматозоидами аликвота. Наличие больших количеств
плоских клеток в эякуляте часто указывает на то, что он получен путем
прерывания коитуса. Если известно, что объем семенной жидкости велик (>6
мл), эякулят следует разделить. При этом используются два контейнера для
образцов: в один должна быть собрана первая порция, в другой - все
остальные. Пациента нужно предупредить о том, что первая, богатая
сперматозоидами порция обычно невелика (пациенты часто стараются
представить два образца равных объемов).
Оплодотворение ооцитов человека
373
6.1.3. Доставив обрвзцв в лаборвторию
Образец семени должен быть доставлен в лабораторию как можно быстрее
после его получения, в идеальном случае в течение 2 ч. Образец при
транспортировке должен находиться при температуре не менее 15 °С и не
выше 38 °С, но не обязательно при температуре тела человека. Более того,
она может оказать повреждающее воздействие на сперматозоиды, так как
является оптимальной для метаболической активности (в результате
повышается образование метаболитов и, вероятно, снижается
жизнеспособность) и, возможно, для роста бактерий. Сперматозоиды,
выделенные из семенной жидкости и помещенные в соответствующую среду
(табл. 14.2 и 14.3), сохраняют жизнеспособность более недели, но, если
спермин остаются в семенной плазме, этот период ограничивается одним
днем.
6.1.4. Воздержание
Время воздержания влияет на качество образца семени. Хотя с увеличением
времени воздержания повышается общее количество сперматозоидов, главным
образом в результате увеличения объемов эякулята, процент подвижных
сперматозоидов и их жизнеспособность снижается. По-видимому, оптимальный
период - 48-72 ч.
6.2. Анализ семени
Детальный анализ физико-химических свойств семени и его клеточного
состава выходит за рамки этой главы. Однако в помощь эмбриологам,
подготавливающим сперматозоиды к процедуре оплодотворения, ниже
приводится краткое обобщение некоторых нормальных характеристик спермы.
Подробные сведения можно найти в превосходной монографии Мортимера [29].
6.2.1. Семеннвя жидкость
Семенная жидкость составляет наибольшую часть эякулята и является
результатом секреции предстательной железы и семенных пузырьков. Вскоре
после эякуляции семя образует коагулят, который в течение 30 мин после
формирования разжижается. Нормально разжиженный эякулят имеет водянистую
консистенцию и может выпускаться из пастеровской пипетки в виде капель.
Вязкость семени со временем увеличивается, что можно определить по
слизевидным тяжам, тянущимся за пастеровской пипеткой, когда ее извлекают
из семени. Повышение
374
Глава 14
Рис. 14.4. Разметка усовершенствованного гемоцитометра Нейбауэра. В
каждом гемоцитометре две камеры. Общее число спермиев в пяти квадратах
(1-5) подсчитывается для каждой камеры. При разведении 1:20 среднее счета
для обеих камер представит концентрацию спермиев в миллионах на
миллиметр.
вязкости не означает, что семя становится менее жидким: разжиженная
сперма может быть достаточно вязкой. Вязкость семени для удобства
подсчета сперматозоидов можно снизить периодическим пипетированием через
пастеровскую пипетку или узкую инъекционную иглу (22-го или 23-го
калибра). Высокая вязкость может привести к неточному счету
сперматозоидов, так как маленькую аликвоту вязкого образца трудно
распределить в счетной камере.
6.2.2. Счетные камеры
А. Гемоцитометр Нейбауэра. Стандартная камера для подсчета сперматозоидов
представлена усовершенствованным гемо-иитометром Нейбауэра (A. R.
Horwell). Она имеет две счетные сетки 3X3 мм. Центральная область (см.
рис. 14.4) разделена
Оплодотворение ооцитов человека
375
A-Hcnwa.ibHbie
m?
8ид
ГбСХ!,
t
^ f?
5'Дефентный размер i
В-Вакцоли-' зирсванный
TTff
Ж-Сросшиеся
Q 0 0 у 9 7 7*|| грушевидные
Д- Интенсивно окрашенные тт т Е'десфорыенные пч
3 Незрелые
? ?
И-Дефепг, с средней частi
К-Деректь' хвоста __
% ? ^ ?
I неправильно \
закру^еичьш У прикрепленный j
6 биде каплевидный
шпильки А коней -
Q . О Q
I короткий if Т
I ^'
1 множественный
Схематическое изображение нормальных и аномальных, сперматозоидов
человека
Рис. 14.5. Схематическое изображение нормальных и аномальных форм
сперматозоидов. Из: Mortimer D. (1985). Current Problems in Obstetrics,
Gynaecology and Fertility. 7. Year Book Medical Publishers.
Воспроизводится с разрешения.
на 25 больших квадратов (5X5) тройными линиями. Площадь каждого большого
квадрата равна 1 мм2 и в свою очередь подразделяется на 16 маленьких
квадратов. При опущенном покровном стекле глубина камеры составляет 0,1
мм. Таким образом, общий объем над каждым большим квадратом составляет
1X1X0,1 мм=10-4 мл. Способ подсчета с помощью гемо-цитометра представлен
в табл. 14.5.
Б. Специализированные счетные камеры. Две специализированные счетные
