Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
32. Marsk L., Larson K. S. (1974). J. Reprod. Fert., 37, 393.
33. Moler T. L., Donahue S. E" Anderson G. B. (1979). Lab. Anim. Sci.,
29, 353.
34. Lyon M. F., Meredith R. (1966). Cytogen, 5, 335.
35. Whittingham D. G., Lyon M. P., Glenister P. H. (1977). Genet. Res.,
29, 171.
36. Whittingham D. G., Lyon M. F., Glenister P. H. (1977). Genet. Res.,
30, 287. •37. Zeilmaker G. H., Atberda A. Т., van Gent /., Rijkmans С. М.
P. М., Drogen-
dijk A. C. (1984). Fertil. Steril., 42, 293.
38. Cohen J., Simons R. F., Edwards R. G" Fehilly С. B., Fishel S. B.
(1985). J. In Vitro Fert. Embryo Transfer, 2, 59.
39. Lassalle B., Testart J., Renard J.-P. (1985). Fertil. Steril., 44,
645.
40. Whittingham D. G. (1985). In: In Vitro Fertilization and Donor
Insemination. Thompson W., Joyce D. N. and Newton J. R. (eds). Royal
College of Obstetricians and Gynaecologists, Loudon, p. 269.
41. Chen C. (1986). Lancet, No. 8486, 884.
ГЛАВА 14
ОПЛОДОТВОРЕНИЕ ООЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА И КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ
ПРЕДИМПЛАНТАЦИОННЫХ ЭМБРИОНОВ
Питер Брауде9 1. Введение
Разработка метода оплодотворения in vitro (OIV) с последующей
имплантацией эмбрионов в материнский организм позволила многим бесплодным
парам иметь собственных детей. Однако соответствующие методические
процедуры нуждаются в существенных усовершенствованиях, а для этого
необходимо лучше понимать механизмы оплодотворения у человека,
анализировать каждую неудачную попытку оплодотворения или трансплантации.
В настоящей главе мы изложим технику получения сперматозоидов и ооцитов,
опишем процедуры оплодотворения и культивирования человеческих эмбрионов
in vitro. Эти методы уже применяются в клинике, однако очень велика их
роль и в исследовательской работе с человеческим материалом, которая
необходима для разработки новых направлений терапии бесплодия [1].
2. Источники ооцитов и эмбрионов человека для проведения исследований
2.1. Получение ооцитов и эмбрионов
2.1.1. Оплодотворение in vitro в тервпевтических целях
Вероятность начала беременности после оплодотворения in vitro значительно
возрастает, если в матку имплантировать несколько эмбрионов [2]. Чтобы
иметь их в достаточном количестве, разработаны методы суперовуляции,
позволяющие получать в результате лапароскопии сразу много ооцитов. Эти
методы основаны на использовании человеческих менопаузальных
гонадотропинов, представляющих собой смесь лютеинизирующе-го (ЛГ) и
фолликулостимулирующего гормонов (ФСГ), полу-
*> Peter R. Braude. Embryo and Gamete Research Group, Department of
Obstetrics anci Gynaecology, University of Cambridge Clinical School,
Rosie Maternity Hospital, Cambridge, UK.
358
Глава 14
ченных из постменопаузной мочи; они применяются самостоятельно или в
комбинации с кломифеном - антагонистом рецепторов эстрогенов [4].
Предовуляционная доза в 5000-10 ООО ME человеческого хорионического
гонадотропина (чХГ Profasi Serono Labs; Pregnyl, Organon Labs) за 34-36 ч
до аспирации фолликулов инициирует разрушение зародышевого пузырька и
окончательное созревание ооцитов.
С возрастанием числа имплантированных эмбрионов растет и число случаев
многоплодной беременности, для которой характерен повышенный риск
спонтанного аборта или недоношенности [5]. В связи с этим обычно
рекомендуется ограничивать число имплантируемых эмбрионов тремя.
Полученные "лишние" эмбрионы могут быть, с согласия супружеской пары,
использованы для исследовательской работы (разд. 8).
2.1.2. Перенос гамет в фаллопиевы трубы
Перенос гамет в фаллопиевы трубы (ПГФТ)-относительно новое многообещающее
терапевтическое средство преодоления бесплодия в тех случаях, когда
патологии труб нет (бесплодие из-за недостаточного объема спермы или
нарушения транспорта спермиев) [6]. Ооциты извлекают из фолликулов, а
затем с помощью тонкого катетера возвращают в фаллопиевы трубы с
небольшой аликвотой отмытых сперматозоидов. Риск получения многоплодной
беременности вынуждает ограничить число ооцитов, переносимых в фаллопиевы
трубы, двумя-тре-мя. Таким образом, в результате этой клинической
процедуры также окажутся "лишние" ооциты, которые можно использовать для
исследований.
2.2. Донорские ооциты
Донорами ооцитов для эмбриологических исследований могут быть пациентки,
подвергающиеся лапароскопической стерилизации, если они согласятся на
стимуляцию суперовуляции [7]. Процедура сбора яйцеклеток не должна
длиться дольше времени анестезии, требующегося для операции стерилизации.
В таких случаях стимуляция суперовуляции может осуществляться одним из
двух методов (рис. 14.1). Во-первых, можно пользоваться фиксированным
графиком стимуляции, при котором день менструации сдвигается в результате
изменения длины предыдущего менструального цикла с помощью прогестерона
[8]; подходит и скользящий график, при котором день применения чХГ
приурочен к времени хирургической операции [9]. Оба метода дают
возможность получить яйцеклетки,
Оплодотворение ооцитов человека
