Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
Типирование тканей
231
Литература
Еу P. L., Prowse S. J.3 Jenkin С. R. (1978). Immunochemistry, 15, 429.
Fathman G. C. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Pernis, eds.), Vol. 1, p. 207. Academic Press, New York.
Fazekas de St. Groth S. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Pernis, eds.), Vol. 1, p. 1. Academic Press, New York.
Fazekas de St. Groth S., Scheidegger D. (1980). J. Immunol. Methods, 35, 1.
Forni L. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Pernis, eds.), Vol. 1, p. 151. Academic Press, New York.
Gottlieb P. D„ Marshak-Rothstein A., Auditore-Hargreaves K., Berkoben D. B„ August D. A., Rosche R. М., Benedetto J. D. (1980). Immunogenetics, 10, 545.
Johnson J. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Pernis, eds.), Vol. 1, p. 261. Academic Press, New York.
Kohler G., Fisher Lindahl K., Heusser C. (1981). In: The Immune System (С. M. Steinberg and I. Lefkovits, eds.). Vol. 2, p. 202, Karger, Basel.
Lemke H., Hammerling G. J., Hammerling U. (1979). Immunol. Rev., 47, 175.
Marshak-Rothstein A., Fink P., Gridley Т., Raulet D. H., Bevan M. J., Gefter M. L. (1979). J. Immunol., 122, 2491.
Oi V. Т., Jones P. P., Goding J. W., Herzenberg L. A., Herzenberg L. A. (1978). Curr. Top. Microbiol. Immunol., 81, 115.
Ozato K., Mayer N., Sachs D. H. (1980a). J. Immunol., 124, 533.
Ozato K„ Hansen Т. H., Sachs D. H. (1980b). J. Immunol., 125, 2473.
Ozato K., Mayer N. М., Sachs D. H. (1982). Transplantation, 34, 113.
Pohlit H. М., Widmer J., Freeh R. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Pernis, eds.), Vol. 1, p. 403. Academic Press, New York.
Stocker J. W„ Bernoco D. (1979). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Pernis, eds.), Vol. 1, p. 217. Academic Press, New York.
Tada N., Kimura S., Hammerling U. (1981). In: Monoclonal Antibodies and Т-Cell Hybridomas (G. J. Hammerling, U. Hammerling and J. F. Kearney, eds.), p. 38. Elsevier, Amsterdam.
Глава 13
Тесты для выявления лимфокинов, поддерживающих рост В-клеток
Томас Леандерсон
I. ВВЕДЕНИЕ
В последние годы исследования активации В-клеток были сконцентрированы на растворимых «факторах», которые, вероятно, принимают участие в регуляции ответных реакций клеток. Растворимые факторы, опосредующие В-клеточные реакции in vitro, впервые описаны в двух работах (Dutton et al., 1971; Schimpl, Wecker, 1972). Недавно благодаря открытию и определению свойств фактора роста Т-клеток (Morgan et al., 1976), который был потом назван интерлейкином-2 (ИЛ-2), существенно расширилось представление о закономерностях роста Т-кле-ток in vitro. Эти исследования стимулировали работы по поиску сходных лимфокинов, действующих на клетки В-ряда.
Показано, что активированные В-клетки отвечают на действие растворимых факторов, секретируемых в культуральную жидкость растущими in vitro Т-хелперами или Кон-А-стимули-рованными спленоцитами крыс, увеличением включения тими-дина и ускорением созревания клеток с образованием бляшкообразующих клеток (БОК) (Melchers et al., 1980; Andersson et al., Andersson, Melchers, 1981). Позднее были получены данные о лимфокинах, избирательно поддерживающих рост В-клеточных популяций (Howard et al., 1982; Lernhardt et al., 1982; Leanderson et al., 1982; Yoshizaki et al., 1983), а также о различных факторах, стимулирующих созревание до клеток, продуцирующих иммуноглобулины (Isakson et al., 1982; Paige et al., 1982; Elkins, Cambier, 1983; Brooks et al., 1983). Однако результаты, свидетельствующие о возможности разделения факторов, поддерживающих пролиферацию, и факторов, способствующих созреванию клеток, нельзя считать однозначными, так как во многих тестах при оценке процессов клеточной пролиферации используют такие концентрации антител анти-IgM, которые подавляют созревание клеток (Leanderson, Forni, 1984). Вместе с тем известны довольно полно охарактеризованные факторы, обладающие способностью регулировать ответы В-клеток, такие как ИЛ-2, у-интерферон и ИЛ-1 (Parker, 1982; Nakamura et al., 1984; Corbel, Melchers, 1983).
Тесты для выявления лнмфокинов
233
Ряд проблем, связанных с анализом опосредованного факторами роста созревания В-клеток, заслуживают особого внимания. Многие приемы анализа лимфокинов связаны с измерением эффектов in vitro в сложных смесях клеток. Вследствие этого остается неясным, действуют ли изучаемые факторы непосредственно на В-клетки или они оказывают на них косвенное влияние. Этой проблемы можно избежать, если при определении ростовой и «дифференцировочной» активности факторов использовать в качестве клеток-мишеней клонированные опухолевые клетки. Однако подобный выход из положения не является идеальным, так как возникает вопрос, обладают ли апробированные в «опухолевой» системе факторы тем же действием в «неопухолевой» системе в физиологических условиях. Дополнительные сложности возникают из-за гетерогенности содержащих факторы культуральных жидкостей, в связи с чем трудно определить, вызывается ли наблюдаемый эффект in vitro молекулами одного типа или нескольких типов сразу. Затруднения вызывает и то, что многие лимфокины плохо разделяются на обычных колонках и сходят в одном пике. Вообще следует отметить, что стремление использовать гомогенные клеточные линии, изменять плотности клеток, снижать концентрации сыворотки в средах может приводить к созданию искусственной ситуации, когда культивируемым in vitro клеткам начинает недоставать факторов, обеспечивающих их жизнеспособность, а не факторов, специфически связанных с процессами роста и дифференцировки. Сейчас очевидно, что анализ ответов В-клеток на действие различных факторов не является такой же стандартной процедурой, как в случае аналогичных реакций Т-клеток. Несмотря на сообщения о возможности длительного культивирования нетрансформированных В-клеточных линий (Howard et al., 1981), по-прежнему отсутствуют надежные и воспроизводимые методы получения и поддержания таких линий.
