Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
Номер донора1) Меченные ’Н-лейцином связанные Н-2-тнп
антитела, нмп/мин1)
В8-24-3 (1>1,анти-К k) Н141-30 (v3,aHTH-D^ )
3) день I3* день 0 день 1
день 0
6 150 120 152 63 wl7lwl7
7 4127 3 655 2071 1419 ЫтП
8 3325 2 951 167 55 KbDwl7fwI7*’>
9 3527 3 180 1909 1284 Ыи>17
Общая радиоак
тивность, имп/мин 19 089 19 078 15 346 13 390 ---
•) Kfihler et al., 1981: Lemke et al., 1979.
*) Получены скрещиванием мышей (NMB6XB10.CAS2)XB10.CAS2—H-2b/w^^
XH-2wl7/wl7.
') 1,2-10° свежевыделенных клеток (день 0). 1,8-10* клеток на следующий день (день 1).
*) Рекомбинант.
Таблица 12-4. Н-2- и 1а-типирование клеток лимфатических узлов мышей
Номер донора1) Меченные “Н-лейцином связанные антитела, Н-2-тнп
имп/мнн*)
10-3.6 14-4-4 28-14-8
SD (7>2а,антн-1-Е ***) Q
(у2а,аити-1-А *) (V2a,aHTH-D )
39 316 106 11734 qlwl7
40 5 647 3203 112 sp/wl7
41 199 55 9418 q/wl7
42 293 110 11693 q/wl7
43 4 420 2565 98 sp/wl7
Общая радио 22338 7509 27233 _
активность,
имп/мин
¦) Мыши из помета (NMRIXSPRETUS)XB10.CAS2-H-2?/4,XH-2“l77/a/7 *) 01 et al., 1978; Ozato et al., I980a,b.
уровни связывания. Можно также идентифицировать 3—4 типа антигенов Т1а с помощью одного препарата антител без титрования (табл. 12-5).
Очищенные препараты биосинтетически меченных антител являются идеальными индикаторами для тестов ингибирования
230 Глава 12
Таблица 12-5. TL-типирование с помощью моноклональных антител
Тип реакции Меченные 3Н-лейцнном связанные
антитела1), нып/ыин на 107 тимоцитов
Пс-тнп (18/20:65/26) Линия 18/20 65/26
(1>2а,антн-ТЬ.шЗ) (Ц,анти-ТЬ.ш5)
а + + : + В6.77а‘> 8 604 2 420
В6.77а'> 10580 2 888
SJL 7 632 2 160
d + + : --- В10.М 7 939 255
В6.АС2 8 922 357
А.СА 8 214 235
с, е и др. + : --- DBA/2 4 734 489
C57L/J 1537 514
C57L/J 1537 563
B10.STA10 2 238 232
Ь ---: --- C57BL/6 42 252
C57BL/6 61 235
k.Tla 212 448
Общая радиоактивность,
имп/мин 20571 23 743
') Lemke et al., 1979; Tada et al., 1981.
с применением немеченых конкурирующих лигандов. Препараты, в которых более 90% радиоактивности входит в состав специфически взаимодействующих антител, могут быть использованы в равновесных тестах связывания для измерения плотности антигена и констант сродства (Fazecas de St. Groth, 1979). Иногда измеряют количество несвязанной радиоактивности в супернатанте после центрифугирования, а равновесные условия поддерживают за счет уменьшения числа промывок.
Примечание, добавленное при корректуре
Приготовление препаратов для определения радиоактивности на жидкостном сцинтилляционном счетчике (разд. V.2) можно упростить. Клеточные осадки можно вносить во флаконы в капле БСА-буфера, добавлять в них по 10 мл Picofluor (Packard) и просчитывать образцы сразу без переваривания и охлаждения. Эффективность счета при применении Picofluor составляет по отношению к варианту с применением Soluene 350 и стандартного сцинтиллятора 85% для контрол ей, 55—65% для образцов с клетками и незначительно зависит от степени контаминации проб эритроцитами. Потеря эффективности полностью компенсируется экономией времени и простотой предлагаемой процедуры.
