Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лефковитса И. -> "Иммунологические методы исследований" -> 75

Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.

Лефковитса И., Перниса Б. Иммунологические методы исследований — М.: Мир, 1988. — 530 c.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка): immunologicheskiemetodi1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 69 70 71 72 73 74 < 75 > 76 77 78 79 80 81 .. 239 >> Следующая

Использование системы ISODALT
197
Рис. 11-5. Аппарат для создания градиента при получении градиентных полиакриламидных гелей.
8. Аппарат для создания градиента
Аппарат для создания градиента представляет собой плексигласовую коробку с диагональной перегородкой, которая делит ее на две камеры для компонентов градиента с различной концентрацией акриламида (рис. 11-5). Передняя стенка коробки съемная и крепится набором винтов. На ее дне имеется два отверстия с соединительной трубкой-смесителем, в которой перед попаданием в заливочную емкость соединяются два компонента градиента. В левом отсеке коробки содержится 640 мл, а в правом — 540 мл соответствующих акриламидны.х смесей. Правый отсек предназначен для компонента с меньшей, а левый— для компонента с большей плотностью.
198 Глава 11
Рис. 11-6. Штатив для загрузки кассет. Кассета с гелем помещена в положение, необходимое для нанесения столбика геля.
9. Штатив для загрузки кассет гелем
На рис. 11-6 показан штатив для нанесения ISO-геля на DALT-пластину. Размеры передней части штатива соответствуют размерам пластин.
10. Штатив для вынимания геля из кассет
На рис. 11-7 показан штатив из плексигласа, на котором удобно вынимать гель из кассет. Штатив устроен, как подставка для книги с углом раскрытия 150°; на этой подставке кассета с гелем раскрывается как книга.
11. Устройство для высушивания гелей
Устройство, позволяющее одновременно сушить 20 гелей, было сконструировано в Базельском институте по чертежам, полученным от д-ра Гэррелса из лаборатории Колд-Спринг-Хар-бор, США. Оно состоит из пяти выдвижных отсеков (рис. 11-8), в каждом из которых помещаются четыре геля. Правая и левая
Использование системы ISODALT
199
г

Рнс. 11-7. Штатив для извлечения геля из кассет. Кассета раскрыта, рядом тефлоновый нож.
Рис. 11-8. Устройство для высушивания гелей (конструкция д-ра Гэррелса из лаборатории Колд-Спрннг-Харбор, США). На нем можно одновременно высушивать 20 гелей.
половины выдвижных отсеков имеют по плоскому нагревательному элементу, закрепленному на дне, индивидуальному выходу на вакуумный насос и таймеру. Мощность каждого из десяти нагревательных элементов 200 Вт. Вакуум создается вакуумным насосом L3708 (Pumpenbau Schaffhausen, Швейцария).
200 Глава 11
12. Камера для радиоавтографии
Высушенные гели экспонируют с рентгеновской пленкой в деревянной камере с 20 полками. Тесный контакт между гелем и пленкой обеспечивает надувная подушка, которая находится в зазоре между полками (зазор 2,5 см). Воздух под давлением 160 мбар подают в каждую подушку индивидуально от баллона со сжатым газом.
13. Кассеты для радиофлюорографии
Для экспонирования при —70 °С применяют кассеты для пленок 20X25 см (Kodak).
14. Пленки
Как для радиоавтографии, так и для радиофлюорографии используют пленку XAR-5 (Kodak) 20X25 см.
15. Бумага для высушивания гелей
Для высушивания гелей (2 геля на лист) используют бумагу Whatman № 3, которую нарезают листами 19X39 см.
16. Пленка Saratt
Для того чтобы при высушивании гели не контактировали с резиновыми прокладками, их покрывают пленкой Saran (Dow Chemical Co.).
17. Автомат для проявления пленок
Для проявления пленок используют автомат X-Omat модели М7А фирмы (Kodak).
Б. Растворы и буферы
1. Солюбилизирующий буфер
2% NP-40 (BDH, Цюрих)
1% 2-меркаптоэтанола (Merck, ФРГ)
2% амфолинов, pH 9—11 (LKB, Брома, Швеция)
9 М мочевина (Schwartz-Mann)
Доводят pH до 9,5 и хранят в аликвотах по 1 мл при —70°С.
Использование системы ISODALT
201
2. Анолит и католит для ISO-разделения
Анолит (кислый электролит): 0,085% Н3РО4 Католит (щелочной электролит): 0,02 н. NaOH
3. Исходный раствор полиакриламида для ISO-гелей
30%-ный акриламид (Bio-Rad) смешивают с 1,8%-ным N, N'-метиленбисакриламидом (Bio-Rad). Раствор готовят один раз в неделю и хранят при 4°С.
4. Смесь амфолинов для ISO-гелей
Смешивают следующие амфолины (LKB, Швеция): с диапазоном pH 3,5—9,5 (восемь частей), с диапазоном pH 2,5—4 (одна часть) и с диапазоном pH 4—6 (две части).
Полученную смесь разливают порциями, которые используют в течение нескольких месяцев.
5. Персульфат аммония для ISO - и DAL Т-гелей
Раствор персульфата аммония (Bio-Rad) с концентрацией 100 мг/мл готовят раз в неделю и хранят в темноте при 4°С.
6.-Уравновешивающий буфер для ISO-гелей после изоэлектрофокусирования.
14,2 г Trizma base (Sigma)
20 г ДСН (Serva)
48 мл 2-меркаптоэтанола (Merck)
95 мл глицерола (Sigma)
Немного бромфенолового синего Компоненты буфера растворяют в 1 л воды, pH доводят до
6,8. Буфер разливают по 3 мл в пробирки, в которые после изоэлектрофокусирования помещают ISO-гели.
7. Раствор хромовой кислоты
для мытья трубок ISO -аппарата
Хромовую кислоту (раствор Chromerge, Fisher Scientific) в тефлоновом моечном сосуде используют до тех пор, пока ее цвет из желто-коричневого не станет синеватым.
Предыдущая << 1 .. 69 70 71 72 73 74 < 75 > 76 77 78 79 80 81 .. 239 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed