Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
IV. ОБСУЖДЕНИЕ
Три типа методов ВЖХ, описанные в этой главе, дают возможность очищать и анализировать иммуноглобулины быстрее .и с большей чувствительностью, чем обычные методы колоночной хроматографии. В настоящее время емкость колонок для ВЖХ не так велика, как емкость колонок для обычной хроматографии, но уже начато производство препаративных колонок .для ВЖХ. Доступны также колонки для ионообменной ВЖХ, использование которых здесь не обсуждалось. Методы получения высокоочшценных препаратов моноклональных антител и их анализа становятся очень важными не только потому, что эти препараты представляют интерес для биохимиков при исследовании регуляции иммунного ответа и связывания с антигенами, но и потому, что они все шире применяются в медицине для диагностики и лечения. Методы ВЖХ обеспечивают необходимую для решения этих задач разрешающую способность и высокую скорость проведения разделений.
Литература
Alfredson Т. V., Wehr С. Т., Tollman L., Klink F. (1982). J. Liq. Chromatogr., 5> 489—524.
Alvarez V. L., Roitsch C. A., Henriksen O. (1981). In: Immunological Methods (I. Lefkovits and B. Perris, eds.), Vol. II, pp. 83—103. Academic Press, New York. [Имеется русский перевод: Иммунология. Методы исследований, М, «Мир», 1983.]
Anzano М. A., Roberts А. В., Smith J. М., Lamb L. С., Sporn М. В. (1982). Anal.
Biochem., 125, 217—224.
Bernardi G. (1971). In: Methods in Enzymology (S. P. Colowick and N. O. Kaplan, eds.), Vol. 22, pp. 325—339. Academic Press. New York.
Хроматография иммуноглобулинов
149
Bhown A. S., Benett J. С. (1984). In: Protides of the Biological Fluids (H. Pee-ters, ed.), Vol. 32, pp. 1041—1048. Pergamon Press, Oxford.
Dickerman J., Clevinger B., Friedersen B. (1981). J. Exp. Med., 153, 1275— 1285.
Fleischman J. B., Pain R., Porter R. R. (1967). Arch. Biochem. Biophys. Suppl., 1, 174.
Corbunoff M. J., Timasheff S. N. (1984). Mech. Anal. Biochem., 136, 40—445.
Henson G. W. (1985). In preparation.
Henson G. W„ Alkati S. (1985). In preparation.
Juarez-Salinas H., Engelhorn S. C., Bigbee W. L., Lowry M. A., Stanker L. H. (1984). BioTechniques, 2, 164—169.
Kopaciewicz W., Regnier F. E. (1982). Anal. Biochem., 126, 8—16.
Pearson J. D., Lin N. Т., Regnier F. E. (1982). Anal. Biochem., 124, 217— 230.
Langone J. J. (1982). J. Immunol. Methods, 55, 277—296.
Regnier F. E. (1983). In: Methods in Enzymology (С. H. W. Hirs and Serge N. Timasheff, eds.), Vol. 91, P. I, pp. 137—190. Academic Press, New York.
Rousseaux J., Picqtte М. Т., Bazin H., Biserte G. (1981). Mol. Immunol., 18, 639—645.
Rubinstein М., Rubinstein S., Familletti P. C., Gross M. S., Miller R. S., Wald-man A. A., Pestka S. (1979). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 76, 640—644.
Snyder L. R„ Kirkland J. J. (1979). Introductions to Modern Liquid Chromatography. Wiley (Interscience), New York.
Titani K., Sasagawa Т., Resing K, Walsh K. A. (1982). Anal. Biochem., 123, 408—412.
Глава 8
Получение липосом, содержащих мембранные белки лимфоцитов
Питер Робинсон
I. ВВЕДЕНИЕ
Для изучения иммунологических реакций на молекулярном уровне необходимо создание модельных антигенных систем, в которых молекулы-мишени с известными химическими свойствами взаимодействуют с клетками иммунной системы. В случае антигенов клеточных поверхностей модельная система может включать вместо клеток искусственные носители — липосо-мы. Поскольку мембранные белки обычно нерастворимы в воде, с ними работают только в присутствии детергентов, которые способствуют солюбилизации белков, эффективно заменяя липидное окружение. В связи с тем что детергенты токсичны по отношению к живым клеткам, перед проведением опытов на клетках их необходимо удалять. После удаления детергентов в присутствии липидов могут формироваться искусственные мембраны. Когда мембранные белки включаются в образующиеся таким образом липидные пузырьки, они имитируют клеточные антигены и эффективно стимулируют иммунные реакции.
Возможность создания модельных систем, содержащих мембранные белки, позволяет конструировать липосомы с заранее заданными свойствами. Некоторые из таких систем будут описаны в конце этой главы.
II. ВЫДЕЛЕНИЕ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ
А. Принцип метода
Общее описание методов выделения мембранных белков дали Такач и Штеелин (Takacs, Staehelin, 1981). В нашей лаборатории мембраны выделяют гипотоническим лизисом клеток с последующей механической дезинтеграцией и разделением по плотности. Неионный детергент тритон Х-100 эффективно солюбилизирует клеточные мембраны, не вызывая существенной денатурации белков. Обогащение мембранными гликопротеинами достигается за счет применения иммобилизованных лекти-нов, таких как гемагглютинин из чечевицы Lens culinaris (ГЧ)
Получение липосом
15 L
.для содержащих маннозу гликопротеинов и лектин из касторовых бобов Ricinus communis (RcH, или ЛБ), специфичный к .галактозе. Выделение индивидуального поверхностного белка с помощью иммуносорбента с моноклональными антителами мы .проиллюстрируем здесь на примере получения молекул Н-2КЬ.
