Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
тканей 437
Хромосомы, определение их числа 508—509
Циклизация плазмиды 67—68 Циклофосфамид, обработка зародышей птиц 429
Цитолитические Т-клеточиые гибридомы 286—290, 296—299
----клоны 281
-------выделение 285
-------среда для культивирования 282—
283
Цитотоксические Т-клетки, активация 157
— Т-лимфоциты 285, 289, 292—296 Цитотоксический микротест 497 Цитотоксичность клеточио-опосредованная
505—506
Чувствительность системы ISODALT двумерного электрофореза 213—214
Экстракция мини-плазмид 76—77 Электрофорез 489, 492
Электрозидосмос в системе ISODALT двумерного электрофореза 214—215 Эритроциты, конъюгироваиие арсоиата 317 Эукариотическая система 72—73 Эффективность включения метки прн биосинтетическом мечеиии 220—221
Ядрышки, подсчет прн изучении эритроцитов 508
Яйца птнц, высверливание скорлупы, инъекции и забор крови 426—428
----источники 422—424
----получение, инкубация и просвечивание 424—426
Оглавление
Предисловие редактора перевода...................................... 5
Предисловие......................................................... 7
Список авторов ..................................................... 9
Список сокращений...................................................12
Глава 1. МЕТОДЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В МОЛЕКУЛЯРНОЙ ИММУНОЛОГИИ: «ПРОГУЛКА ВДОЛЬ ХРОМОСОМЫ» В ОБЛАСТИ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ (М. Стейнметц,
Д. Стефен, Г. Р. Дастурнику, Э. Джибб и Р. Романюк) .... 16
I. Введение....................................................16
II. Материалы...................................................17
III. Конструирование космидных библиотек.........................18
A. Частичный гидролиз эукариотической ДНК...................19
Б. Фракционирование в сахарозном градиенте..................19
B. Идентификация фракций, содержащих фрагменты ДНК размером 30—50 kb............................................21
Г. Приготовление «плеч» вектора..............................22
Д. Лигирование фрагментов вектора и эукариотической ДНК 23
Е. Упаковка in vitro.............................. . . 24
Ж. Титрование................................................24
3. Рассев библиотеки.........................................25
И. Получение реплик..........................................25
К. Лизис и связывание с ДНК..................................27
IV. Скрининг космидных библиотек................................ 27
A. Преинкубация.............................................27
Б. Гибридизация.......................................... 28
B. Промывка.................................................29
Г. Радиоавтография, проявление, хранение....................29
Д. Идентификация н отсев положительных колоний ... 30
Е. Повторный скрининг положительных колоний .... 31
Ж. Хранение космидных клонов . .................31
V. Характеристика космидных клонов ........ 32
A. Выделение ДНК............................................32
Б. Анализ методом дот-блот..................................33
B. Рестрикционное картирование..............................33
Г. Выделение зондов для «прогулки вдоль хромосомы» . . 34
VI. Критическая оценка..........................................35
Литература...................................................37
Глава 2. ТРАНСФОРМАЦИЯ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ ДНК (Дж. Мак-Кабрн)................................................38
I. Введение................................................ . 38
II. Доминантные селектируемые маркеры ....... 39
III. Методы стабильного переноса генов...........................40
Оглавление
519
А. Копреципнтация ДНК с фосфатом кальция .... 40
Б. Слияние бактериальных протопластов..........................42
IV. Другие методы стабильного переноса генов.......................46
Литература.....................................................'46
Глава 3. КЛОНИРОВАНИЕ кДНК С ПОМОЩЬЮ ВЕКТОРОВ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИХ ЭКСПРЕССИЮ В КЛЕТКАХ-ХОЗЯЕВАХ (М. Хирама) .............................................................48
I. Введение.....................................................48
II. Общие подходы и связанные с ними трудности..................49
III. Экспериментальные процедуры..................................54
A. Материалы общего назначения и исходные растворы . . 54
Б. Получение полисомной мРНК..................................54
B. Подготовка вектора-затравкн................................58
Г. Получение линкеров.........................................61
