Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лефковитса И. -> "Иммунологические методы исследований" -> 214

Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.

Лефковитса И., Перниса Б. Иммунологические методы исследований — М.: Мир, 1988. — 530 c.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка): immunologicheskiemetodi1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 208 209 210 211 212 213 < 214 > 215 216 217 218 219 220 .. 239 >> Следующая

Сублиния / была получена от линии G, выведенной Тохинаи и Катагири (Tochinai, Katagiri, 1975) путем многократного случайного спаривания братьев и сестер. После того как было установлено, что животные стали практически гистосовмести-мыми, были проведены тесты в СКЛ, которые показали идентичность особей и по этому критерию. После этого генетическими методами была продемонстрирована гомозиготность животных.
Сублиния г получена от лягушек-альбиносов линии Хоперской (Hoperskaja, 1975) и передана Н. Коэну в Рочестер. Линия была гетерозиготной по генам МНС. Путем скрещивания были получены гомозиготные по генам МНС животные.
Клоны. Гибриды между X. laevis и X. gilli или X. miilleri могут давать диплоидные яйца, имеющие одинаковый геном, идентичный геному матери. Гиногенетическое развитие, которое индуцируется спермой, облученной ультрафиолетовым светом,
476 Глава 25
позволяет получать клоны животных (Kobel, Du Pasquier, 1975). Существует семейство LG-клонированных животных, для которых известны характеристики МНС (Bernard et al., 1979). Животные средних размеров (масса 30 г) имеют 36 хромосом, генетически идентичны, все женского пола, гетерозиготны по МНС. Недавно получены новые гибриды и идет выведение новых клонов, отличающихся от полученных ранее. В настоящее время существуют и LM-клоны животных (гибриды X. laevisX XX tniilleri). Самки клона LM3 удобны для массового получения яиц, так как они крупнее самок LG-клона и дают большие количества яиц, из которых до 50% являются диплоидными.
III. ХИРУРГИЧЕСКИЕ ПРОЦЕДУРЫ НА Xenopus
А. Маркировка животных
Анестезированных взрослых Xenopus можно пометить термокаутером; отметки различимы на протяжении нескольких месяцев. Можно использовать для маркировки аутотрансплантаты, которые сохраняются в течение всей жизни животного, однако этот способ требует слишком больших затрат времени.
Широко использовалось для маркировки обрезание ноготков на задних лапках (в соответствии с каким-либо кодом), однако ноготки быстро растут и возможна их естественная утрата.
В качестве метки используют также бусинки, которые пришивают к коже животного (Nace, 1982).
Б. Забор крови у взрослых лягушек
1. Приготовление пипеток
Для успешного забора крови принципиальное значение имеет правильная подготовка стеклянных пипеток (рис. 25-3). Кончик пастеровской пипетки оттягивают дважды. Сначала пипетку вносят в слабое пламя бунзеновской горелки и, не дожидаясь. пока стекло совсем размягчится, начинают оттягивать кончик так, чтобы стенки образующегося капилляра были как можно тоньше. Затем капилляр располагают на несколько сантиметров выше слабого пламени горелки и производят второе, окончательное оттягивание его кончика. Обламывая самый кончик оттянутого капилляра пинцетом, получают острие. Мягкий вход пипетки в вену в значительной степени зависит от качества этого острия, которое в свою очередь определяется толщиной стенок капилляра и формой острия. Размер отверстия кончика пипетки следует подбирать в зависимости от размера вены животного. Для того чтобы свести к минимуму разруше-
Изучение иАмунной системы Xenopus
477
Рис. 25-3. Стеклянные пипетки для забора крови у Xenopus. Наверху — хорошая пипетка, внизу — плохая.
ние тромбоцитов, полезно, хотя и не обязательно, ,силикони-ровать пипетку. (Силиконирование производят следующим образом: в пипетку набирают, а затем выпускают из нее неразбавленный реагент Rhodorsil 240. После выдувания остатков реагента пипетку высушивают в течение ночи при 150 °С.) Такая обработка позволяет проводить длительный забор крови без образования сгустков, что существенно при получении больших количеств крови для приготовления сыворотки. Если необходимо получить клетки или плазму крови, то перед введением в вену кончик пипетки заполняют примерно 50 мкл ЗФР для амфибий, в котором содержится 10 ед./мл гепарина.
Для стерильного забора крови конец пастеровской пипетки запаивают, в противоположное отверстие кладут кусочек ваты и стерилизуют пипетку. Непосредственно перед использованием кончик пипетки оттягивают и обламывают в стерильных условиях. Опыт нашей работы с применением антибиотиков в средах и соблюдением простых мер по хранению пипеток в чистом месте свидетельствует о том, что в процессе забора крови загрязнения проб не происходит.
2. Забор крови
Проще всего отбирать кровь из дорсальной вены плюсны задней лапки взрослых лягушек среднего размера (—150 г) после их наркотизации. Для наркотизации животных помещают на 5—10 мин в воду, содержащую 5 г/л анестетика MS222”
ч MS222 — трикаинметансульфонат. Для этих же целей можно использовать уретан. — Прим. ред.
478 Глава 25
(Sandoz, Базель, Швейцария). Лягушку заворачивают в бумажное полотенце так, чтобы наружу торчала левай или правая задняя лапка. Вена идет точно вдоль лапки по Направлению к первому пальцу, на котором нет черного ногс^тка. Если кровь получают для стерильной культуральной работы, кожу протирают 70%-ным спиртом. Делают кожный разрез ножницами перпендикулярно оси лапки (рис. 25-4). Вена становится доступной после второго разреза, который делают перпендикулярно первому. На пипетку надевают резиновую трубку, через которую ртом втягивают кровь в кончик пипетки.
Предыдущая << 1 .. 208 209 210 211 212 213 < 214 > 215 216 217 218 219 220 .. 239 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed