Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лефковитса И. -> "Иммунологические методы исследований" -> 204

Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.

Лефковитса И., Перниса Б. Иммунологические методы исследований — М.: Мир, 1988. — 530 c.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка): immunologicheskiemetodi1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 198 199 200 201 202 203 < 204 > 205 206 207 208 209 210 .. 239 >> Следующая

0,58 мм, наружный диаметр 0,96 мм) или S055 Dural Plastics (внутренний диаметр 0,80 мм, наружный диаметр 1,20 мм). Вставленную канюлю фиксируют шелковой лигатурой. Если через канюлю лимфа не поступает, не исключено, что трубка неправильно вставлена в просвет лимфатического протока или ее конец располагается около клапана лимфатического протока.
•> Щетка — волосы за копытом. — Прим. ред.
Овца как экспериментальная модель
451
В последнем случае канюлю вынимают, вводят в просвет протока небольшую с расширением на конце иглу и разрушают клапан. После этого канюлирование протока должно пройти успешно.
6. Через разрез канюлю выводят наружу, накладывают на нее минимум два фиксирующих шва и убеждаются, что поток лимфы через канюлю не задерживается при перемещениях ноги. Если при этом ток лимфы все же замедляется, то меняют положение канюли.
7. Накладывают швы на фасцию и края кожи сводят с помощью зажимов Мишеля.
8. Лимфу собирают в стерильный пластмассовый сосуд, подвязанный к держателю, который фиксируют на коже около надреза. В сосуд предварительно вносят 500 ед. гепарина, 500 ед. пенициллина и 500 мкг стрептомицина. Обратите внимание на то, чтобы дно сосуда для сбора лимфы находилось ниже уровня подколенного лимфатического узла. Канюлирование эфферентного протока подколенного лимфатического узла позволяет получать ежедневно 0,5—1-109 малых лимфоцитов в течение 3—4 нед без каких-либо нежелательных эффектов.
3. Канюлирование афферентного протока
до его входа в подколенный лимфатический узел
Этот метод позволяет проводить прямую антигенную стимуляцию одиночного лимфатического узла, например подколенного. Последующий иммунный ответ можно регистрировать в лимфе эфферентного протока, канюлированного, как описано выше. На этой модели получены прямые данные о том, что стимулированные антигеном клетки лимфатического узла лишены прямого контакта с кровью и что их распространение и развитие генерализованного иммунного ответа зависят от интакт-ности лимфатической системы (Trnka, Cahill, 1980). Афферентные лимфатические протоки обнаруживаются с каждой стороны возвратной вены предплюсны и могут быть относительно легко канюлированы.
1. Делают разрез длиной 5 см над vena saphena lateralis между щеткой и скакательным суставом.
2. Вену выделяют тупым путем из окружающей соединительной ткани. С каждой стороны вены можно обнаружить по
2—3 лимфатических сосуда диаметром от 0,5 до 1 мм.
3. Временно перевязывают шелком протоки, чтобы они набухли.
4. Выбирают самый толстый проток и накладывают на него две тонкие шелковые лигатуры (не затягивая их окончательно) на расстоянии 2—3 см одну от другой.
452 Глава 24
5. Надрезают и канюлируют проток, создавая в нем давление при помощи дорсально расположенной лигатуры. Продвигают канюлю на 3—4 см вверх по протоку.
6. Для фиксации канюли затягивают обвязанные вокруг протока лигатуры.
7. Для проверки правильного положения канюли в нее вводят 0,5 мл 0,25%-ного солевого раствора синьки Эванса: голубая окраска должна .немедленно появиться в эфферентном лимфатическом протоке.
8. Через разрез канюлю выводят наружу и фиксируют ее на коже двумя швами.
9. Вводят достаточный для наполнения канюли объем солевого раствора с гепарином (5 ед./мл) и наружный конец канюли запаивают на огне. Конец канюли завязывают узлом и подвязывают к ноге животного. При введении антигена запаянный конец канюли отрезают и антиген инъецируют в лимфатический узел через афферентный лимфатический проток.
4. Канюлирование эфферентного протока
предлопаточного лимфатического узла
Канюлирование эфферентного протока предлопаточного лимфатического узла, описанное Педерсоном и Моррисом (Pederson, Morris, 1970), дает возможность получать 1,0—2,0-109 малых лимфоцитов ежедневно в течение 3—4 нед без каких-либо негативных последствий для животного. 60—70% лимфоцитов являются Т-клетками, а остальные 30—40% в основном В-клет-ками.
1. Предлопаточный лимфатический узел локализуют пальпацией. Он имеет диаметр 2—2,5 см и располагается под брахиоцефальной мышцей впереди и чуть выше уровня плечевого сустава (рис. 24-5).
2. Вдоль шейного углубления делают разрез длиной 10 см.
3. Поднимают с помощью пинцета Аллиса брахиоцефальную мышцу, чтобы обеспечить доступ к жировой подушке на ее тыльной стороне.
4. Тупым путем выделяют участок эфферентного лимфатического протока в жировой ткани и вводят в него канюлю на расстоянии по крайней мере 1—2 см от лимфатического узла. Обычно легко обнаруживаются один или два крупных эфферентных протока (диаметр 2—3 мм). Эти протоки идут вент-рально в жировой ткани под мышцей и располагаются вблизи артериальных и венозных сосудов лимфатического узла.
Овца как экспериментальная модель
453
Брахиоцефальная
Рис. 24-5. Канюлирование эфферентного протока предлопаточного лимфатического узла. Детали см. в тексте.
5. Через разрез канюлю выводят наружу, рану зашивают и собирают лимфу в стерильный пластмассовый флакон, содержащий гепарин и антибиотики.
Предыдущая << 1 .. 198 199 200 201 202 203 < 204 > 205 206 207 208 209 210 .. 239 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed