Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
В описанный метод «прогулки вдоль хромосомы» могут быть введены дополнительные усовершенствования, причем некоторые из них в настоящее время уже испытываются в ряде лабораторий. Например, метод рекомбинации и селекции in vivo — сходный с тем, который описан для библиотек на основе бактериофага К (Seed, 1983), — применяется вместо скрининга путем гибридизации (Poustka et al., 1984). К тому же в конструировании библиотек, обогащенных нужными последовательностями ДНК, может помочь выделение хромосом или фрагментов хромосом с помощью фракционирования по размерам, сортировки под контролем флуоресценции или же переноса ДНК в клетки с другой генетической структурой. Наконец, для выделения большого числа зондов из представляющего интерес участка, что ускоряет «прогулку вдоль хромосомы», могут применяться опыты по «прыжкам вдоль хромосомы» (McClelland et al.,
Методы, применяемые в молекулярной иммунологии
37
1948) и микрохирургия определенных участков хромосомы (Roh-me et al., 1984).
Нет сомнений, что метод «прогулка вдоль хромосомы» будет широко использоваться в будущем для построения молекулярных карт больших участков хромосомы, а также для выделения и характеристики генетических областей, для которых единственными зондами являются соседние гены. Это существенно для обнаружения и характеристики пока не известных генов, а также при картировании элементов, важных для эволюции хромосом млекопитающих, таких как горячие точки при рекомбинации.
Литература
Bender W„ Spierer P., Hogness D. S. (1983). J. Mol. Biol., 168, 17.
Birnboim H. C. (1983). In: Methods in Enzymology (R. Wu, L. Grossman, and K. Moldave, eds.), Vol. 100, p. 243, Academic Press, New York.
Blin N.. Stafford D. (1976). Nucleic Acids Res., 3, 2303.
Carroll М. C., Campbell R. D., Bentley D. R., Porter R. R. (1984). Nature (London), 307, 237.
Chaplin D. D., Woods D. E., Whitehead A. S., Goldberger G., Colten H. R„ Seid-man J. (1983). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 6947.
Collins Hohn B. (1978). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 4242.
Dretzen G., Beleard М., Sassone-Corsi P., Chambon P. (1981). Anal. Biochem., II, 295.
Durand R„ Bregegere F. (1984). Nucleic Acids Res., 12, 703.
Eickbush Т. H„ Kafatos F. C. (1982). Cell, 29, 633.
Grosveld F. G., Dahl H. H. М., de Boer E., Flavell R. A. (1981). Gene, 13, 227. Grosveld F. G., Lund Т., Murray E. Mellor A. L„ Dahl H. H. М., Flavell R. A.
(1982). Nucleic Acids Res., 10, 6715.
Hanahan D., Meselson Л1 (1983). In: Methods in Enzymology (R. Wu, L. Grossman, and K. Moldave, eds.), Vol. 100, p. 333, Academic Press, New York. Jsh-Horowicz D., Burke J. F. (1981). Nucleic Acids Res., 9, 2989.
Kafatos F. C., Jones C. W., Efstratiadis A. (1979). Nucleic Acids Res., 7, 1541. Klein Figueroa F., David C. S. (1983). Immunogenetics, 17. 553.
Maniatis Т., Fritsch E. F., Sambrook 1982. Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
McClelland М., Kessler L. G., Bittner M. (1984). Proc. Natl. Acad. Sci USA 81 983.
Pearson W'. R. (1982). Nucleic Acids Res., 10, 217.
Pirotta V., Hadfield C., Pretorius G. H. J. (1983). EMBO J„ 2, 927.
Poustka A., Rackwitz H.-R., Frischauf A.-M., Hohn P., Lehrach H. (1984) Proc Natl. Acad. Sci. USA, 81, 4129.
Rohme D„ Fox H., Herrmann B., Frischauf A.-M., Edstrom J.-E. Mains P.
Silver L. М., Lefirach H. (1984). Cell, 36, 783.
Seed B. (1983). Nucleic Acids Res., II, 2427.
Shimizu A., Takahashi N., Yaoita Y„ Honjo T. (1982). Cell, 28, 499.
Steinmetz М., Hochtl J., Schnell H.t Gebhard W., Zachau H. G. (1980). Nucleic Acids Res., 8, 1721.
Steinmetz M„ Winoto A., Minard K., Hood L. (1982a). Cell. 28, 489.
Steinmetz M„ Minard K., Horvath S., McNicholas Frelinger J., Wake С
Long E„ Mach B., Hood L. (1982b). Nature (London), 300, 35.
Steinmetz М., Malissen M„ Hood L„ Orn A., Maki R. A.. Dastoornikoo G R
Stephan D., Gibb E., Romaniuk R. (1984). EMBO J„ 3. 2995.
Weiss E. H., Golden L.. Fahrner K.. Mellor A. L„ Devlin J. J. Bullman H Tid-dens H„ Bud H., Flavll R. A. (1984). Nature (London), 310, 650
Глава 2
Трансформация лимфоидных клеток с помощью ДНК
Дж. Мак-Кабри
I. ВВЕДЕНИЕ
В настоящей главе описаны методы, позволяющие вводить гены в лимфоидные клетки. Конкретно речь идет о слиянии с бактериальными протопластами и о копреципитации ДНК с фосфатом кальция. Эти методы просты, и их можно применять в любой лаборатории, поскольку они не требуют сложного оборудования. Методы трансформации, обсуждаемые в этой главе, особенно удобны для получения стабильных трансформированных клеток, т. е. трансформантов, которые сохраняют введенные в них гены при поддержании давления отбора.
Перенос генов представляет собой ценный метод для изучения структуры и функции генов, а также для определения того, какие элементы контролируют экспрессию генов. Функции различных участков генов иммуноглобулинов исследовали с помощью введения модифицированных иммуноглобулиновых генов в клетки различных линий и стадий дифференцировки В-лимфо-цитов (Banerji et al., 1983; Gillies et al., 1983; Neuberger, 1983; Queen, Baltimore, 1983). Кроме того, перенос генов оказался ценным методом при их идентификации. Гены, выделенные впервые гибридизацией с зондами, относящимися к классу
