Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
3. Клоны ЦТЛ третьего типа
Клоны ЦТЛ третьего типа происходят из тех клеточных вариантов, которые со временем вытесняют другие клетки. Клетки этих клонов конститутивно экспрессируют рецепторы ФРТК, что обусловливает их ростовые преимущества в среде, содержащей ФРТК, и не требуют каких-либо стимуляторов или фидерных клеток (рис. 17-2). Клоны ЦТЛ третьего типа имеют измененный хромосомный набор (Johnson et al., 1982) и, вероятно, находятся на пути к злокачественной трансформации. Поскольку клоны третьего типа сохраняют специфическую логическую активность, они могут быть полезны при анализе анти-ген-специфических рецепторов и их генов.
296 Глава 17
ИЛ-2, %
Рис. 17-1. Размножение трех Ly2+-клонов второго типа, специфичных к антигену самцов, в среде, содержащей ФРТК, в отсутствие (штриховая линия) илн в присутствии (сплошная линия) клеток-стимуляторов.
Рис. 17-2. Размножение двух LyJ+-клонов третьего типа, специфичных к антигену самцов, в среде, содержащей ФРТК, в отсутствие (штриховая линия) или в присутствии (сплошная линия) клеток-стимуляторов.
В. Цитолитические Т-клеточные гибридомы
Предшествующие попытки получения Т-клеточных гибридов путем слияния клеток смешанной культуры лимфоцитов с клетками тимомы были неудачными (Kohler et al., 1977). Было выдвинуто предположение, что ЦТЛ лизируют опухолевые клетки до того как они гибридизуются (Kohler et al., 1977). Для предотвращения этого лизиса перед слиянием цитолитические клеточные популяции обрабатывают трипсином (Kaufman et al.,
1981), однако было показано, что эта обработка не обязательна (Nabholz et al., 1980).
1. Т-клеточные гибридомы, конститутивно проявляющие цитолитическую активность
При гибридизации перитонеальных клеток иммунизированных мышей или клеток смешанной культуры лимфоцитов с AKR-тимомой BW5147 были получены гибриды, которые конститутивно проявляют цитолитическую активность (Kaufman et al., 1981, 1982а,b). Однако высокую цитолитическую активность эти гибриды проявляли только после обработки гибридных клеток и (или) клеток-мишеней нейраминидазой. Специфичность полученных гибридов не установлена. Ни в нашей, ни
Цитолитические Т-клеточные клоны и гибридомы
297
в других лабораториях (Nabholz et al., 1982) не удалось получить Т-клеточные гибридомы, стабильно проявляющие цитоли-тическую активность при слиянии клеток тимомы с клетками смешанной культуры лимфоцитов или клетками ЦТЛ второго типа. Гибриды, проявляющие устойчивую и специфическую ци-толитическую активность, были получены только при слиянии клеток AKR-тимомы с клонами ЦТЛ третьего типа. Такие гибриды напоминали по своим свойствам родительские клоны ЦТЛ, так как прикреплялись к подложке, конститутивно экспрессировали рецепторы для ФРТК и цитолитическую активность и нуждались в экзогенном ФРТК (Nabholz et al., 1980; Haas, Kisielow, 1984). По нашему опыту подавляющее большинство гибридов, отобранных в CS-среде и тестируемых приблизительно через 3 нед после слияния, проявляют специфическую цитолитическую активность. У большинства подобных гибридов эта активность была ниже, чем у родительских линий ЦТЛ, однако после двух-трех повторных клонирований мы получали стабильные цитолитические гибридомы.
Из ФРТК-зависимых (CS+) гибридов образуются ФРТК-не-зависимые (CS-) варианты (Conzelmarm et al., 1982а; Haas, Kisielow, 1984). Подавляющее большинство С5_-вариантов по своим свойствам сходно с родительскими опухолевыми клетками; они не способны прикрепляться к подложке, лишены цитолитической активности и не нуждаются в экзогенном ФРТК для размножения. С5_-варианты не имеют рецепторов для ФРТК и растут в присутствии антител к этим рецепторам; это свидетельствует о том, что данные варианты ФРТК-независимы (Haas, Kisielow, 1984). CS-среда не индуцирует проявления цитолитической активности у С5_-клеток.
Частота выщепления С5_-вариантов варьирует для различных С5+-гибридов от 1 на 2-105 клеточных делений до 0 на 4-108 клеточных делений (Conzelmarm et al., 1982а; Haas, Kisielow, 1984).
CS+'Гибриды, которым свойственна высокая частота выщепления CS--вариантов, часто утрачивают цитолитическую активность и чувствительность к ФРТК. Причины согласованной утраты цитолитической активности и чувствительности к ФРТК не ясны. Было показано, что связывание ФРТК с соответствующим рецептором достаточно для индукции цитолитической активности клеток клонов ЦТЛ второго типа (Lefrancois et al.,
1984). На основании этого было высказано предположение, что взаимодействие ФРТК со своим рецептором является необходимым условием проявления цитолитической активности. Однако мы обнаружили один вариантный С5_-клон, который больше был похож на родительский клон ЦТЛ, чем на родительские опухолевые клетки, поскольку клетки этого клона прикреп-
298 Глава 17
Рост в среде
с ФРТК без ФРТК
сЬ ¦ О
1
? / о
db ¦ Ьс а
1 сЬ
j
&
Рис. 17-3. Образование цитолитиче-ских гибридов и нецитолитических вариантов. ЦТЛ-клон третьего типа, экспрессирующий специфическую (Y) цитолитическую активность (К) и рецепторы к ФРТК (черные квадраты), гибридизовали с тимомой BW5147, которая не экспрессирует ни рецепторов к ФРТК, ни рецепторов к антигену (Snodgrass, 1984, личное сообщение). В результате были получены ФРТК-зависимые гибриды, имеющие специфическую цитолитическую активность, из которых возникли неци-толитические варианты и один цито-литический ФРТК-независимый вариант CS-. Этот вариант CS- вновь гибридизовали с ЦТЛ-клоном третьего типа. В результате были получены ФРТК-зависимые гибриды, обладающие специфическими свойствами обоих родителей. Из этих гибридов возникли ФРТК-независимые варианты CS-, сохраняющие литическую активность. Все клетки, за исключением BW5147, в ответ на Кон-А или антиген синтезируют у_интеРФеРон- Овалами обозначены прикрепляющиеся клетки, а кружками — неприкрепляю-щиеся.
