Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
При повторной стимуляции соответствующими облученными клетками селезенки было получено дальнейшее обогащение популяции специфическими Т-клетками. После того как клетки селезенки иммунизированных самок мышей H-2bC57BL/6 были дважды стимулированы in vitro облученными клетками селезенки самцов C57BL/6, в этих культурах уже не удавалось больше обнаружить Т-клеток, реактивных по отношению к аллоантигенам МНС. Повторная стимуляция клетками селезенки самцов, экспрессирующими рекомбинантные гаилотипы МНС, позволила отобрать клетки, несущие рецепторы к антигенам самцов и проявляющие различные специфичности и функции: стимуляция клетками самца, экспрессирующими антиген Н-2Ь класса I, но не антиген Н-2Ь класса II МНС, является селективной для Ьу2+-ЦТЛ против антигенов класса I и неблагоприятной для размножения Ьу2~-Т-хелперов, специфичных к антигенам класса II. В то же время стимуляция клетками самца, экспрессирующими антиген Н-2Ь класса II, но не антиген Н-2Ь класса I, является селективной для Ьу2_-Т-хелперов против антигенов класса II и неблагоприятна для размножения Ьу2+-ЦТЛ, специфичных к антигенам класса I (von Boehmer, Haas, 1984). Этим способом могут быть разделены не только функционально различные субпопуляции, но и клетки, проявляющие некие тонкие специфичности: клоны ЦТЛ, специфич-
294 Глава 17
ные для антигена А, так же как и клоны, специфичные для антигена В, могут быть отобраны при поочередной стимуляции сначала клетками, экспрессирующими антиген А, а затем клетками, экспрессирующими антиген В (Hiining, Bevan, 1982). Возможность отбора специфических Т-клеток с помощью описанной процедуры указывает на то, что в гетерогенных популяциях недавно активированных Т-клеток существуют ростовые преимущества для тех клеток, которые взаимодействуют с антигеном. Преимущественный рост антиген-стимулированных клеток наблюдается даже в культурах, содержащих экзогенный ФРТК. Недавно было показано, что антигенная стимуляция регулирует уровень экспрессии рецепторов к этому ростовому фактору (Cantrell, Smith, 1983).
Б. Клоны ЦТЛ
1. Клоны ЦТЛ первого типа
Клетки, отобранные в массовой культуре, могут быть клонированы при помощи микроманипуляций с эффективностью, варьирующей в пределах 10—30%. В одной серии экспериментов на мышах мы клонировали ЦТЛ от самок Fi-гибридов (BGxCBA), иммунизированных спленоцитами самцов СВА. Через 7 сут после иммунизации клетки самок стимулировали в культуре клетками селезенки самца СВА и спустя 10 дней клонировали стимулированные клетки. Как показано в табл. 17-3, подавляющее большинство клонов (больше 80%)
Таблица 17-3. Частота встречаемости автономно размножающихся цитолитических Т-клеточных клонов против специфического трансплантационного антигена самцов1 >
Номер Эффективность Число тестиро Число специфичных клонов, %
цитолитических автономно раз
множающихся2)
1 16 15 15(100) 3(20)
2 23 22 21(95) 6(27)
3 11 11 11(100) 3(27)
4 15 14 12(86) 6(42)
') 107 клеток из лимфатических узлов самок гибридных мышей (BGXCBA)Fi, иммунизированных клетками селезенки самцов СВА. культивировали с 107 облученных рентгеном клеток селезенки самцов СВА. Клоны, полученные из этих культур, тестировали на специфическую цитолитическую активность и способность к автономному размножению в ответ на стимуляцию облученными клетками самцов СВА в отсутствие экзогенного ИЛ-2.
г) Клоны считали положительными, если стимуляция их пролиферации клетками самцов не меиее чем втрое превышала стимуляцию клетками самок.
Цитолитические Т-клеточные клоны и гибридомы
295
оказались цитолитическими и могли быть подразделены на два типа в соответствии с их ростовыми потребностями: 20—40% клонов можно было заставить размножаться добавлением суспензии спленоцитов, лишенных Т-клеток, в отсутствие экзогенного ростового фактора (табл. 17-2). Эти клоны ЦТЛ первого типа были направлены против антигенов МНС класса I (они лизировали мишени, негативные по антигенам класса II), но для индукции их пролиферации требовались специальные клетки-стимуляторы, большинство из которых экспрессировали антигены класса II (von Boehmer et al., 1984). Размножение клонов ЦТЛ первого типа, вероятно, обусловлено выработкой Т-клет-ками эндогенного ФРТК, поскольку в супернатанте культур клонов этого типа был обнаружен ИЛ-2 (von Boehmer, Turton,
1983), а их размножение может быть подавлено как антителами к ФРТК, так и антителами к рецептору этого лимфокина (Meuer et al., 1984). Этот фенотип клонов ЦТЛ не устойчив в условиях культуры и через несколько недель закономерно переходит в фенотип, который мы назвали вторым типом.
2. Клоны ЦТЛ второго типа
Клоны ЦТЛ второго типа требуют для размножения присутствия антигена и экзогенного ФРТК. Антигенная стимуляция увеличивает число рецепторов ФРТК в расчете на одну клетку. Если не обеспечить контакта с антигеном, то клетки не пролиферируют в ответ на ФРТК (рис. 17-1) и погибают через 8— 10 сут культивирования. В противоположность клонам первого типа клоны второго типа могут существовать в культуре в течение нескольких месяцев без каких-либо изменений в способности к пролиферации или способности лизировать клетки-мишени.
