Иммунологические методы исследований - Лефковитса И.
ISBN 5-03-0011-70-6
Скачать (прямая ссылка):
Содержание специфических антител определяют в культу-
Выделение клонов аллореактивных Т-хелперов
279
Таблица 16-1. Сравнение эффективности активации В-клеток аллореактивными клонами в массовой культуре и при использовании метода лимитирующих разведений
Массовая культура
Время культивирования, сут
0 8 12
Число клеток, имеющих Ig на по 8-104 Не опреде- Не опреде
верхности ляли ляли
Число клеток, имеющих Ig в ци <103 1,9-10е Не опреде
топлазме ляли
Общее содержание Ig в надосадоч <0,1 Не опреде 330
ной жидкости (мкг/мл) ляли
Лимитирующие разведения1) Изотипы
IgM IgG IgA IgE
Частота активированных предшест 1/15 1/8 1/25 1/1800
венников
Средний размер клона (нг/культура) 80 20 25 2
') В-Клетки периферической крови стимулировали клетками аллореактивиого клона ж 2 мл массовой культуры или в условиях лимитирующих разведений в луиках микропанелей Терасаки. В-Клетки идентифицировали окрашиванием поверхностного Ig. Клетки, -содержащие цитоплазматический Ig. выявляли на 8-е сутки, используя стандартный метод иммунофлуоресценции на фиксированных препаратах. Общее содержание иммуноглобулина как в массовых культурах, так и при использовании лимитирующих разведений определяли с помощью иммуноферментного анализа.
ральной среде. Было обнаружено, что частота встречаемости В-клеток, активированных к выработке антител против столбнячного токсина, различается у иммунных и неиммунных доноров и при этом всегда превышает те величины, которые получают при неспецифическом антигенном стимулировании (Lan-zavecchia et al., 1983). Это означает, что описанная аллореак-тивная система может быть полезна для количественных оценок репертуара В-клеток памяти.
Условия, которые необходимы для активации В-клеток посредством аллореактивных клонов, заслуживают особого внимания. В тех культурах, в которых Т-хелперный клон активируется соответствующим облученным стимулятором, для активации большинства В-клеток не требуется ни связывания антигена, ни взаимодействия с Т-хелперным клоном (Lanzavec-chia, 1983). Следовательно, активация В-клеток, которую не
280 Глава 16
удается получить в бесклеточной культуральной среде от активированных хелперных клонов, вероятно, опосредуется локальной продукцией неспецифических факторов роста и созревания В-клеток. Таким образом, главное ограничение настоящей системы поликлональной активации В-клеток, а именно узкая специфичность Т-клеточных клонов, может быть преодолено. При условии доступности Т-хелперного клона и соответствующих клеток-стимуляторов можно без ограничений активировать любой источник В-клеток. Сходная хелперная система с неограниченными возможностями может быть в принципе получена при добавлении в .культуру лектина, такого как ФГА или лектин из лаконоса, благодаря которым обходят проблему специфичности Т-хелперного клона. Лектин-активируе-мая система, однако, гораздо менее эффективна, так как лектин, кроме того, снимает и запрет на активацию и функционирование всех цитотоксических Т-клеток, присутствующих в культуре.
Остается неясным, почему аллореактивные хелперы активируют в среднем только одну из пяти В-клеток. Это может определяться либо тем, что полученная эффективность клонирования все еще не достаточно высока, либо выборочной стимуляцией определенной подгруппы В-клеток. Тем не менее условия активации, коммитирование большинства активированных клеток к выработке IgG или IgA, а также результаты новейших экспериментов по фракционированию В-клеток указывают на то, что данная аллореактивная система обеспечивает количественно репрезентативную активацию предсуществующего пула В-клеток памяти, возникших в результате первичного иммунного ответа in vivo.
Рекомендуемая литература
Chiorazzi М., Fu S. М., Kunkel Н. G. (1979). Immunol. Rev., 45, 219.
Gillis S., Ferm М. М., Ou W., Smith. K. A. (1978). J. Immunol., 120, 2027. Lanzavecchia A. (1983). Eur. J. Immunol., 13, 820.
Lanzavecchia A., Parodi B. (1984). Clin. Exp. Immunol., 55, 197.
Lanzavecchia A., Parodi B., Celada F. (1983). Eur. J. Immunol., 13, 733. Lefkovits I., Waldmann H. (1979). Limiting Dilution Analysis of Cell in the Immune System, Cambridge Univ. Press, London — New York.
Meuer S. G., Hussey R. E., Cantrell D. A., Hodgdon 3. C., Schlossmati S. F., Smith K. A., Reinherz E. L. (1984). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 1509. Pawelec G., Schneider E. М., Wernet P. (1983). Immunol. Today, 4, 275.
Ramarli D., Parodi B., Fabbi М., Corte G., Lanzavecchia A. (1984). J. Exp. Med., 159, 318.
Siegal F. P., Siegal M. (1977). J. Immunol., 118, 642.
Sinigaglia F., Scheidegger D., Talmadge K., Carotta G. (1985). J. Immunol. Methods, 76, 85.
